作者tirecake (^^)
看板Biotech
标题Re: [问题] 请问有关western blotting的transfer问题
时间Sun Apr 2 12:57:53 2006
※ 引述《albertwang (会思考的鱼)》之铭言：
: ※ 引述《ghjkl (黄宝臻黄宝臻黄宝臻)》之铭言：
: : 各位先进大家好
: : 小弟目前再进行western blotting的实验
: : 由於希望能同时观察100多Kd和30多Kd的蛋白
: : 所以在transfer时会把时间拉长
: : 但最近有各疑问就是
: : 我这样的加长时间会不会造成较小的蛋白穿过PVDF而跑掉呢
: 30那一个机会满大的
: 不过你用nc membrames
: 你的问题就不见啦
: : 在我看的一些protocol的网站中
: : 好像都没有看到这一类的说明
: : 不知道有没有人可以解说一下呢
蛋白质的SIZE是多大阿
这种基本的问题我都查不到
我做的是Bcl-2 Bax caspase 3,cytochrome c.
我是用semi-dry的方法只用300mA
相当於4~5V而己
TRANSFER後的GEL 染Coomasie blue 还是很蓝很蓝
但我用湿式 效率就很好 但杂bend很多 我用40microgram
transfer久一点或电流调高 蛋白会不会穿透呢
我的prestain marker 72kDa的会到滤纸上耶
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 61.62.195.21
1F：推 linzhengzhan:一般来说，应该是不会啦！但，我不知道有无例外 04/02 13:19
2F：→ linzhengzhan:Protein size的查阅，一般应该是从NCBI上会是比较快 04/02 13:20
3F：→ linzhengzhan:的方法。 04/02 13:21