前天刚讲完的seminar 作了一点小整理 跟大家分享 Therapeutic silencing of an endogenous gene by systemic administration of modified siRNAsNature. 2004 Nov 11;432(7014):173-8. 1)本篇是第一篇利用修饰的siRNA来默化内生性基因(apoB使其不能合成LDL Cholestrol) 以达到治疗功效 2)作者本先利用在antisense strand siRNA 接上cholestrol 来增加此siRNA的药理特性 包括1.增加其半衰期2.较不易被血浆清走 3.使比较易与人类血清蛋白作结合4.并可以在 人类的肝脏及空肠能侦测到有接上cholestrol的iRNA(因为apoB mRNA与protein 存在此处]5.接上chol的siRNA在人类血清内其存在完整性比没有接上的还有多50%以上 表示其稳定性比较佳 3)作者利用生物资讯选了84组siRNA并在nucleotide上面作甲基化及两股间作 Phosphorothioate修饰来防止被体内或细胞的exo与endonclease切掉并在3端 加上cholestrol增加药理特性并使其到达apoB之处而可以在此处降解apoB最後 在in vitro中选出两组chol-apoB1-siRNA及chol-apoB2-siRNA 4)作者有用萤光试验测试接了chol的siRNA其默化的能力是否会消失 因为依旧会使萤光 表现降低所以结论是不会 5)进入老鼠实验验证chol-apoB1-siRNA会存在肝脏及空肠并会有抑制老鼠的 apoB mRNA protein的功效进而利用NMR作lipoprotein profile可以看到LDL 与chylmicron会有降低40%以上的功效因为它们两个的内生性基因是apoB100与apo48 6)最後作者担心大家怀疑chol-apoB1-siRNA会如同一般的药是乱攻击所以利用5-RACE 来证明此siRNA切割的位置正如同他所设计的 7)最後结论部分作者提到可以利用siRNA用在临床上来默化内生性基因而在siRNA 上作其他修饰可以增加其特性 **本篇可贵地方在於第一篇成功用siRNA默化在哺乳类体内的内生性基因 -- 变变变 时代正在改变 扁扁扁 选叫爱要选阿扁 梦想就要实现 阳光已经看见 --

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