作者vmp (邪恶系美少女KJ)
看板Biotech
标题Re: 萤光免疫染色
时间Tue Nov 16 00:19:11 2004
※ 引述《keku (月光下轻舞)》之铭言:
: : 前一阵子 不断的一抗二抗泡 才增加点灵敏度 但这应该不是办法..-_-;;
: 提高讯杂比或噪讯比(Signal to Noise ratio)是很tricky的问题
: 萤光显微术在硬体上、软体上有些方法可以做enhance 在此先不赘述
在硬体上,最为大家所熟知的工具,就是Confocal,
Confocal的基本原理,大家应该略有耳闻,
这里就先跳过这项工具。
要提到用软硬体改善萤光的呈现,
就要先提到光的特性。
请大家想像一下,当一个「点」发光时,
除了中心最亮的一点之外,在点的Y方向,会呈现上下两个漏斗状
\./
/ \ 大概像这样......=.=
在立体当中,有很多这样的漏斗状太接近,或互相重叠下,
就会在萤光显微镜中看到「一坨」亮亮雾雾的萤光。
这在一般萤光显微镜中是无法避免的。(不然也不用去用confocal啦~)
光点会呈现上下漏斗这样的特性,
可以用一个叫作
PSF(point spread function)函数来作运算。
这样的运算工具,在很多生物影像分析软体中都有,
这个功能叫作
「3D deconvelusion」
例如Metamorph、IPP(image pro plus)
或是在各单位采买的显微镜附属软体中都可以找到这样的功能。
(不过这个功能都是要加钱才能买到)
大家有兴趣的话,可以参考下列网站:
MetaMorph
http://www.image1.com/products/metamorph/
IPP(Image-Pro plus)
http://www.mediacy.com/ipp/imageproplus.htm
Zeiss
http://0rz.net/8002Y
Leica
http://www.leica-microsystems.com/website/lms.nsf
讲这麽多,不如让大家看一下,经过3D deconvolusion运算的结果:
http://www.image1.com/products/apps/3ddecon.cfm
不过经过软体内写好的公式运算的结果,还是有那麽一点让人不放心,
再说,同一套软体内,就可能同时存在两种以上不同的运算公式,
套用不同的公式时,可能还有实验设计或记录上问题。
如果能从硬体上做出影像澄清的效果,
还是比较直接爽快。
不过目前能从硬体上做出这样效果的,
除掉confocal不说,
大概只有
Spinning disc和
Apotome
Spinning Disc(PerkinElmer):
http://www.uib.no/med/mic/equipment/UltraView-RS/UltraView-RS.html
Apotome原理:(点选网页右侧其他连结,可看Apotome处理结果)
http://0rz.net/4e02T
有利用到Apotome工具的已发表paper(找一篇大家都可以免费阅读的)
http://www.biomedcentral.com/1471-2121/5/31
另外,
清大江安世老师研发出的
FocusClear药品,
好像也有使影像澄清的作用,
这部分并没有深入找资料啦~
http://magazines.sina.com.tw/bioera/contents/200405/200405-001_7.html
(只看了这个)
希望有用过FocusClear的同学们,能聊一下啦~
用法、使用范围、心得.....还满想知道这个药品在市面上销售和使用情形。
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◆ From: 218.35.20.159
※ 编辑: vmp 来自: 218.35.20.159 (11/16 00:26)
1F:推 keku:怎麽没把TIRFM算进去? ^^ 140.109.214.254 11/16
2F:推 vmp:TIRF吗?我觉得应用上不太一样,多收集一些 220.130.132.190 11/16
3F:→ vmp:资料再来po 220.130.132.190 11/16