作者keku (月光下轻舞)
看板Biotech
标题Re: 萤光免疫染色
时间Mon Nov 15 22:47:39 2004
※ 引述《HIbaby (嗨北鼻)》之铭言：
: : 可是物镜顶多只到100x
: : 要怎麽看的到清楚的mitochondria??
: 请问一下 利用抗体做萤光免疫观察 要怎样提高良好的讯号
: 比方说 该亮的要亮 背景就是背景?
: 前一阵子 不断的一抗二抗泡 才增加点灵敏度 但这应该不是办法..-_-;;
提高讯杂比或噪讯比(Signal to Noise ratio)是很tricky的问题
萤光显微术在硬体上、软体上有些方法可以做enhance 在此先不赘述
针对抗体染色 最常碰到染不好的原因就是
1. Wash不够乾净 使得溶液中有点晦晦亮亮的
2. 抗体的specificity不够好 乱黏东西以致於非target也会出现讯号
3. 染色时间不恰当 染太快会降低萤光讯号 染太久会让抗体乱黏
其中第2和第3点 个人的经验是会特别take care在1抗上
比起来2抗的性质比较不会bind到unwanted target
关於此类specificity的问题 适当的blocking步骤可以改善许多
至於用以block的蛋白和浓度也需要一些经验
胎牛血清蛋白(BSA)是用得最广泛的 浓度常在2~5% 如果太浓的话
可能aggregation到连抗体都会被遮住
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PTT 统合生命科学研究院
Biotech 生医工程研究所 超高解析率显微技术 研究室
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