※ 引述《datro (事在人为，非环境为)》之铭言： : ※ 引述《zamki (林小布)》之铭言： : : 听说RNAi也颇烧钱的...... : : 麻烦有哪位才子才女跟我说明一下可以吗........^^ : 之前才听到国卫院的老师说过RNAi : 果真是烧钱的东西。 : 好像一个RNAi kit? 15000。 1. 如果只是订购RNA neucleotide, 自己anneal再transfect进细胞, 非常烧钱, 以一个基因踹4段来说, 随便就上万. Dharmacon 赚你的钱也很狠, 这份文件RNAi Technical Reference & Application Guide 现在是免费的, 赶快去申请...厄, 我知道美国是免费, 我不知道台湾啦. http://www2.dharmacon.com/RNAiGuide?source=0 2. 这麽好赚的市场当然不可能全由Dharmacon独享, 所以其他很多家 眼红, 会推出不同方式的也要分食大饼, 比方Invitrogen采用 很长一段DNA-->RNA, Dicer in vitro process之後把片段全部transfect 进细胞, 通杀, 胡了!! 最好祷告这基因不会跟其他基因序列相似. 请进invitrogen.com搜寻BLOCK-iT Dicer RNAi Transfection kit 或stratagene的recombinant Dicer/GeneEraser 3. 以上两种方法都是暂时的, 要stable的话, 另一种方法是在细胞内直接表现 short hairpin RNA片段, 有用retrovirus的, 也可以用lentivirus (如果你的细胞cell cycle不走的话, HIV是你的选择), 比方BD/clontech 的pSiren系列与Invitrogen的Lentiviral RNAi system. 我个人的感觉是, 成功率与否除了跟目标序列有关外, 跟cell line种类也很有关系. 4. 请大家密切注意silencing library, 运气好的话就不用自己做silencing了. 省很多力气, 一般不那麽co的商用公司都会提供已经work的序列, 比方Qiagen http://www1.qiagen.com/Products/GeneSilencing/LibrarySiRna/ 5. 两三年之前pSuper与pSHAG两家实验室对拼stable silencing的时期, 就已经 试过培养中的cell line抑制hepatitis病毒蛋白表现了, 流感这篇文章是 整只老鼠应该比较有趣, 祝各位成功踏平一切基因. --

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