这株菌现在被大量的使用,在此做个简介,希望对大家有所帮助! ^^ Pichia pastoris-the methylotrophic yeast 在过去的20年间，利用甲醇诱导Pichia pastoris生产外源性蛋白的系统已 经高度成熟。此系统越来越大众化的原因包括： (1) 简单的基因转殖技术 ，尤其是与研究已久的菌株Saccharomyces cerevisiae技术上相似。 (2) P. pastoris可制造大量的外源蛋白，且可分泌至胞外或存於胞内。 (3) 可进行真核生物的後转译修饰，如glycosylation、disulfide bond form- ation和proteolytic processing等。 (4) 有商品化的试剂可直接使用於 表现系统。以下会对P. pastoris做简介以及现在应用的方向。 Pichia pastoris一开始是在30年前由Koichi Ogata发现，为一种可单独利 用甲醇作为能源的酵母。之後1970年代由Phillips Petroleum 发展出可用 甲醇连续培养 P. pastoris的程序。 接下来的十年Phillips Petroleum和 SIBIA公司将P. pastoris发展成可表现外源蛋白菌种，SIBIA的研究员也建 立了P. pastoris的程序与详细方法。在1993年，Phillips Petroleum将P. pastoris表现系统的专利卖给 Research Corporation Technologies (Tucson, AZ)，且授权Invitrogen Corporation (Carlsbad, CA)贩售和此 系统相关的药物。 要了解表现系统的原理首先需要知道的是 ，当於醱酵反应至生长限制速率 时喂与甲醇，由於P. pastoris需将大量的甲醇代谢转为能量，其alcohol oxidase (AOX)会表现多达所有可溶蛋白的30%以上。细胞中控制AOX表现的 promoter基因分为AOX1与AOX2，其中又以AOX1控制较大量的AOX，而AOX1的 调控是在於转录层次 ，所以当环境中出现甲醇时可诱导AOX1产生高量的转 录。高外源蛋白表现系统即是在特殊的表现载体上，将目标蛋白序列(YGF, Your Favorite Gene)插入AOX1 promoter与3’AOX1的中间，经过基因重组 和菌体的AOX基因交换。成功转殖後再测试此菌种表现目标外源蛋白的条件 。 此表现系统发展至今有许多改良的载体可供使用，均可在 Invitrogen的公 司网页上得到。有可选择的Secretion signals、Marker genes与不同表现 量的Promoters 。而Northern Regional Research Laboratories也发展出 各种不同Genotype的strains，供适当的Marker与不同条件的蛋白使用。 生产出来的目标蛋白不管原本有无醣化，被表现出来的蛋白都会有部分被醣 化，且原本有醣化的蛋白其醣化位置以及接上的醣基也都会不同，而且接的 位置是随机的。尤其是α-1,6-linked mannose与缺乏α-1,3-linked mann- osylation可能造成目标蛋白无法在人体当药物使用 。然而亦有许多表现成 功且通过严格临床检验的蛋白已在使用，如人体的IGF-1在amyotrophic la- teral sclerosis疗程、serum albumin在取代血清中与南美洲利用hepatit- is B surface antigen制作对抗hepatitis B virus。 -- ******** PTT 统合生命科学研究院 Biotech 生物化学研究所 生物产业研究室 ******** --

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