> ==> [email protected] (N￾N ) 的文章中提到: > 最近从cell上把RNA下来...也转了cDNA > 然後有用一段primer当internal control去夹看看有没有转成功 > 发现是有的!! > 但却可以发现跑完DNA胶後,照出的图中,每一个well最上面 > 位置大约在load well的孔下面一点点皆有一条细细亮亮的band > 我学长说是chromosome,那这对cDNA後续要做的实验会有影响吗? 差太多了！ 经过萃取，只留RNA，去掉DNA，然後再去反转录成cDNA， 接着又去做PCR，怎还会有Chromosome？就是impurity罢了，哪会有 chromosome？ > 因为我的问题来了...就是後来我把cDNA去夹两段片段..都没东西 > 然後我又用gradient方式重找annealing温度还是全没有东西.. > 这时我想会部会我的cDNA..被分解了!!!..但这可能性因不高.. > 後来想会不会是PCR仪器有问题..我家是用PDA的PCR仪器.. > 听说这种跑起来很差..请问有跑过的人,,,对这种仪器有哪些该注意的?? > 或到底好不好用?? > 到底需不需要找厂商来校正... > 谢谢 你有用internal primer和＿＿＿＿primer去夹挤，有产物，产物也符合 你的要求长度吗？如果是的话，那麽PCR mechine就没问题。如果不确定温度的话， 直接由最低温试起，不用Gradient了。 另外，PCR machine有没问题？拿个实验室最熟的DNA与Primers去试就好了， 如果这样都做不出来～再去找厂商吧。 -- * Origin: 中山大学-美丽之岛BBS * From: 61.223.183.233