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标 题Re: [问题]in situ hybridization
发信站KKCITY (Tue Feb 28 11:37:09 2006)
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※ 引述《[email protected] (安分守己)》之铭言:
> ※ 引述《[email protected] ()》之铭言:
> : 如果要侦测的mRNA量可能不多,要用哪种方法好呢?
> real-time PCR 是现今科技最敏感的方法 , FISH不可能
> : 萤光还是酵素labeled的?
> 萤光lable是FISH, AP或HRP应该是成色法吧? 你说哪种会有较佳敏感度
> : 因为我要做RNAi, transfection的效率不够好,
> : 做RT-PCR 应该看不出来吧?
> : 又没有抗体可以做免疫染色,
> : 所以想试试in situ hybridization
> 总之Real-time PCR扣除掉人为技术层面还不行的话
> 那就不可能了
> : 还是大家有其他建议吗?
> : 谢谢!
> 你的问题很矛盾, 做RNAi, transfection的效率不够好
> 理论上mRNA是比较多的吧? 这时都看不出来
> 那transfection的效率好的时候, 要看啥???
谢谢您的回答,不过您可能有些误会了,
我目前只是要测试哪个RNAi construct有效,
要看出细胞中的mRNA是否减少,
因为transfection效率不是很好,<10%,(奇怪的是没transfected的用药也杀不死)
所以才想看single cell level
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