※ [本文轉錄自 FoodInfo 看板] 作者: niicorobin (小不點) 看板: FoodInfo 標題: [檢驗] 三聚氰胺檢測方法 時間: Sun Nov 16 16:06:17 2008 【標題】：三聚氰胺檢測方法（對岸的） 【資料來源】：http://0rz.tw/9f54J 【內文】： 我貼其中一段，HPLC的檢測方法： ========================================================================= 3 高效液相色譜法（HPLC） 3.1 原理 試樣用三氯乙酸溶液-乙腈提取，經陽離子交換固相萃取柱淨化後， 用高效液相色譜測定，外標法定量。 3.2 試劑與材料 除非另有說明，所有試劑均為分析純水，為GB/T 6682規定的一級水。 3.2.1 甲醇：色譜純。 3.2.2 乙腈：色譜純。 3.2.3 氨水：含量為25％～28％。 3.2.4 三氯乙酸。 3.2.5 檸檬酸。 3.2.6 辛烷磺酸鈉：色譜純。 3.2.7 甲醇水溶液：準確量取50 mL 甲醇和50 mL 水，混勻後備用。 3.2.8 三氯乙酸溶液（1％）： 準確稱取10 g 三氯乙酸於1 L 容量瓶中， 用水溶解並定容至刻度，混勻後備用。 3.2.9 氨化甲醇溶液（5％）：準確量取5 mL 氨水和95 mL 甲醇，混勻後備用。 3.2.10 離子對試劑緩衝液： 準確稱取2.10 g 檸檬酸和2.16 g 辛烷磺酸鈉，加入約980 mL 水溶解， 調節pH 至3.0 後，定容至1L 備用。 3.2.11 三聚氰胺標準品：CAS 108-78-01，純度大於99.0%。 3.2.12 三聚氰胺標準儲備液： 準確稱取100 mg（精確到0.1 mg）三聚氰胺標準品於100 mL 容量瓶中， 用甲醇水溶液（3.2.7）溶解並定容至刻度，配製成濃度為1 mg/mL 的標準儲備液， 於4℃避光保存。 GB/T 22388—2008 3 3.2.13 陽離子交換固相萃取柱： 混合型陽離子交換固相萃取柱， 基質為苯磺酸化的聚苯乙烯-二乙烯基苯高聚物，60 mg，3 mL，或相當者。 使用前依次用3 mL 甲醇、5 mL 水活化。 3.2.14 定性濾紙。 3.2.15 海砂：化學純，粒度0.65 mm～0.85 mm，二氧化矽（SiO2）含量為99％。 3.2.16 微孔濾膜：0.2 μm，有機相。 3.2.17 氮氣：純度大於等於99.999％。 3.3 儀器和設備 3.3.1 高效液相色譜（HPLC）儀：配有紫外檢測器或二極體陣列檢測器。 3.3.2 分析天平：感量為0.0001 g和0.01 g。 3.3.3 離心機：轉速不低於4000 r/min。 3.3.4 超聲波水浴。 3.3.5 固相萃取裝置。 3.3.6 氮氣吹幹儀。 3.3.7 渦旋混合器。 3.3.8 具塞塑膠離心管：50 mL。 3.3.9 研缽。 3.4 樣品處理 3.4.1 提取 3.4.1.1 液態奶、奶粉、優酪乳、霜淇淋和奶糖等稱取2 g（精確至0.01 g）試樣於50 mL具塞塑膠離心管中， 加入15 mL三氯乙酸溶液（3.2.8）和5 mL乙腈，超聲提取10 min， 再振盪提取10 min後，以不低於4000 r/min離心10 min。 上清液經三氯乙酸溶液潤濕的濾紙過濾後，用三氯乙酸溶液定容至25 mL， 移取5 mL濾液，加入5 mL水混勻後做待淨化液。 3.4.1.2 乳酪、奶油和巧克力等稱取2 g（精確至0.01 g）試樣於研缽中， 加入適量海砂（試樣品質的4倍～6倍）研磨成乾粉狀， 轉移至50 mL具塞塑膠離心管中，用15 mL三氯乙酸溶液（3.2.8）分數次清洗研缽， 清洗液轉入離心管中，再往離心管中加入5 mL乙腈， 餘下操作同3.4.1.1中“超聲提取10 min，……加入5 mL水混勻後做待淨化液”。 註：若樣品中脂肪含量較高， 可以用三氯乙酸溶液飽和的正己烷液-液分配除脂後再用SPE柱淨化。 3.4.2 淨化 將3.4.1中的待淨化液轉移至固相萃取柱（3.2.13）中。依次用3 mL水和3 mL甲醇洗滌， 抽至近乾後，用6 mL氨化甲醇溶液（3.2.9）洗脫。 整個固相萃取過程流速不超過1 mL/min。 洗脫液於50℃下用氮氣吹乾，殘留物（相當於0.4 g樣品）用1 mL流動相定容， 渦旋混合1 min，過微孔濾膜（3.2.16）後，供HPLC測定。 3.5 高效液相色譜測定 3.5.1 HPLC 參考條件 a) 色譜柱：C8柱，250 mm×4.6 mm（i.d.），5 μm，或相當者； C18柱，250 mm×4.6 mm（i.d.），5 μm，或相當者。 b) 流動相：C8柱，離子對試劑緩衝液（3.2.10）-乙腈（85+15，體積比），混勻。 C18柱，離子對試劑緩衝液（3.2.10）-乙腈（90+10，體積比），混勻。 c) 流速：1.0 mL/min。 d) 柱溫：40℃。 GB/T 22388—2008 4 e) 波長：240 nm。 f) 進樣量：20 μL。 3.5.2 標準曲線的繪製 用流動相將三聚氰胺標準儲備液逐級稀釋得到的濃度為0.8、2、20、40、80 μg/mL 的標 準工作液， 濃度由低到高進樣檢測，以峰面積-濃度作圖，得到標準曲線回歸方程。基質匹配加標三 聚氰胺的樣品 HPLC 色譜圖參見附錄A 中的圖A.1。 3.5.3 定量測定 待測樣液中三聚氰胺的響應值應在標準曲線線性範圍內， 超過線性範圍則應稀釋後再進樣 分析。 3.5.4 結果計算 試樣中三聚氰胺的含量由色譜資料處理軟體或按式（1）計算獲得： A × c × V × 1000 X = × f ……………………（1） As × m × 1000 式中： X —— 試樣中三聚氰胺的含量，單位為毫克每千克（mg/kg）； A —— 樣液中三聚氰胺的峰面積； c —— 標準溶液中三聚氰胺的濃度，單位為微克每毫升（μg/mL）； V —— 樣液最終定容體積，單位為毫升（mL）； As —— 標準溶液中三聚氰胺的峰面積； m —— 試樣的品質，單位為克（g）； f —— 稀釋倍數。 3.6 空白實驗 除不稱取樣品外，均按上述測定條件和步驟進行。 3.7 方法定量限 本方法的定量限為2 mg/kg。 3.8 回收率 在添加濃度2 mg/kg～10 mg/kg濃度範圍內，回收率在80%～110%之間， 相對標準偏差小於10%。 3.9 允許差 在重複性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的10% 【心得感想】： 雖然是對岸的，不過真的很詳細， 對有學儀器分析的人來說應該是不錯的參考資料！ --

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