http://www.mc.ntu.edu.tw/department/ibmb/html/professors/linjy.htm 草菇毒蛋白A2 (Volvatoxin A2；VVA2)是由草菇純化之溶血毒素(hemolysin)，又稱為心 臟毒素(cardiotoxin)。由於分子生物學的突飛猛進，使得在細胞膜上形成pore之蛋白開 始運用在製作人工孔洞並經由控制其開、關，以發展免疫毒素、藥物輸送及生物感測器的 研究領域。本實驗室從草菇中純化之VVA2，可造成細胞溶解的機制是形成pore。此外，利 用limited proteolysis及細菌製作重組蛋白實驗，我們亦鑑定出一段N端片段 (N-terminal fragment; NTF)(1-127殘基)，並發現其具抑制VVA2溶血活性及促進其寡聚 合物形成之效果，且其可在VVA2/reNTF比例高於100時仍具活性，利用BIAcore系統亦證實 reNTF與VVA2兩者具有直接交互作用。利用mutagenesis方法，我們發現由軟體預測出的 VVA2二級結構中的amphipathic -helix B扮演著必要的角色。此外，運用Western blot及 BIAcore系統亦鑑定出reC-terminal fragment (reCTF)(128-199殘基)是VVA2結合至細胞 膜的功能區。經對VVA2結合在膜之複合物進行proteolytic digestion，則確認VVA2 pore 形成功能區位置乃包含C端 -6, 7, 8 strands。將VVA2與十種同源蛇毒蛋白的活性位置， 作胺基酸序列比較分析，發現VVA2 C端區域 (165-195殘基)經醣胺基親合性管柱實驗證明 此段片段具heparin binding site fragment(HBSF)與醣胺基具交互作用，因此推測VVA2 之心臟毒性可能與醣胺基之交互作用有關。 -- 志不定 心不安 --

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