作者pleomax1080 (God)
看板Chemistry
標題[實驗] 請問關於HPLC跑鹽類跟清洗的問題
時間Fri Sep 13 12:34:35 2019
大家好
小弟我最近實驗室要接手操作HPLC
用的移動相是磷酸buffer87%+ACN
管柱是C18
但跑出來的peak因為管柱老化開始嚴重拖尾而且與其它peak黏在一起(之前看學長跑的不
會)
主要是想問幾個問題
爬了很多文 有的人說鹽類跟ACN絕對不能碰在一起
但又有人說這種跑法很常見
結束後用高水相沖洗就可
所以不曉得到底適不適合這樣做
因為目前的program是跑完15分鐘後
會把ACN調到85%
最後會再調到100%沖提
如果會結晶的話是不是每跑一次就虐待管柱一次
目前舊的管柱已用半年
平衡時壓力據說是剛換時的三倍(900升到2700psi)
我接手後已經搞了一個月
甲醇 水 ACN 各種濃度 流速 梯度去洗都試過了
最後還是逆洗 壓力降到1800
但peak還是分不開
老師一直覺得是我們操作問題不願意換管柱
主要還是想問前輩們如果換了新管柱
要怎麼保護避免他那麼快掛掉
謝謝
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1F：→ tony15899: 你用buffer跑的過程中ACN的比例過高時鹽類就析出了 09/13 12:51
2F：→ tony15899: HPLC的條件在分析樣品時"洗管柱"並非必要 09/13 12:52
3F：→ tony15899: 如果不影響分析只要在分析完樣品再洗就好 09/13 12:53
4F：→ tony15899: 你的狀況要洗管柱時還要先用高水相比有機溶劑先洗掉鹽 09/13 12:54
5F：→ tony15899: 類 才能置換成純有機相再洗 09/13 12:55
6F：→ tony15899: 當然那個高水相有機溶劑裡的水是純水 不是用Buffer那瓶 09/13 12:55
7F：→ tony15899: 還有你的pump裡大概也有鹽類累積，最好用溫純水不接 09/13 12:57
8F：→ tony15899: 管柱洗久一點，另外如果有保護管柱的話可以換新的試試 09/13 12:59
9F：→ pleomax1080: 先謝謝樓上的大大 會調高ACN去沖是因為在我們要的東 09/13 13:57
10F：→ pleomax1080: 西(15min)出來之後還會有其它物質(25min)左右 雖然 09/13 13:57
11F：→ pleomax1080: 我不確定是不是要用高有機才沖的出來 我自己沒試過 09/13 13:57
12F：→ pleomax1080: 因為上次業務來看我們的program說建議我們把ACN濃 09/13 13:57
13F：→ pleomax1080: 度調高然後時間拉長 才沖的完全(本來學長只跑ACN85% 09/13 13:57
14F：→ pleomax1080: 2分鐘) 所以我應該試試看不跑梯度 如果後面的peak 09/13 13:57
15F：→ pleomax1080: 還是有出來 就完全不用把ACN調高 一直用87% buffer 09/13 13:57
16F：→ pleomax1080: 去跑 等結束再用水洗+置換成有機相 是這個意思嗎？ 09/13 13:57
18F：→ tony15899: 拉到85%ACN的溶解度都快變0了 09/13 15:48
19F：→ tony15899: 如果你的非高ACN條件能把雜質洗出來就延長時間 09/13 15:54
20F：→ tony15899: 洗不出來就直接打下一針看會不會影響 09/13 15:55
21F：→ pleomax1080: 了解！我再試試看 非常感謝 09/13 17:17
22F：→ toko6290: 才半年很短耶，我們洗法是高純水和高ACN輪流沖洗，共50 09/13 22:15
23F：→ toko6290: 分鐘。 09/13 22:15
24F：→ pleomax1080: 我也跟學長說半年掛掉算快 所以才想辦法延長壽命 09/14 04:32
25F：→ pleomax1080: C18是不是不能純水洗呢？ 09/14 04:33
26F：→ toko6290: C18是有機相，長期用純水洗或跑會讓它變形，大多會加10 09/14 11:07
27F：→ toko6290: 到20%ACN 09/14 11:07
28F：→ toko6290: 我前面的高純水是指高濃度純水，不是100%的 09/14 11:12