作者ivan1209 (根本科科)
看板Chemistry
標題[學習] HPLC tailing的問題
時間Thu Oct 6 04:54:21 2016
大家好，目前小弟在peptides合成的公司上班
今天遇到UPLC在主峰後面有類似tailing(or back shoulder)的問題，當然也有可能是back impurities
我之前大學專題跟研究所都是以研究有機合成為主
HPLC對我來說是完全新的東西目前慢慢在學
先假設這個情況是tailing來說
我的想法是利用ammonium acetate去過一下柱子之後在用95%水洗一下柱子之後再去跑samples
會這樣想是因為我猜NH4+也許可以binding在Si-O-上可以減少tailing的問題
不曉得這樣的觀念是不是有錯誤??
主管他們是決定用pH小於12濃度的的NaOH是洗柱子
結果確實是解決tailing的問題
想請教一下用鹼去洗柱子這樣是甚麼想法為什麼可以解決tailing的問題?
(我們公司很常利用1%TFA and 1g/L NaOH去洗prep HPLC)
非常感謝指教
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 174.63.200.228
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※ 編輯: ivan1209 (174.63.200.228), 10/06/2016 05:01:39
1F：推 ecstasy1: 鹼對si有再生意思? 10/06 08:02
2F：→ sisay: 把Si-OX洗回原本的Si-OH吧 X是不要的離子 10/06 23:40
3F：→ sisay: silanol group 10/06 23:41
4F：→ ivan1209: 但是這樣si-OH又會變Si-O-,之後又會出現tailing吧？ 10/07 01:36
5F：→ sisay: 那就要換endcapped column了 10/07 12:18
6F：→ ivan1209: 是喔......不知道主管他們怎想 謝謝你! 10/07 20:09
7F：→ ng0529: 你的移動相有用緩衝液嗎? 10/16 21:53
8F：→ ng0529: 蛋白質胺基酸兩性，你有用對pH? BUFFER鹽類濃度? 10/16 21:55
不好意思我現在想不大起來當初的條件(我記得buffer蠻複雜的)
一般我們都是用0.1%TFA in water, 0.05M Ammonium acetate in water(pH調到9)
or TEA + phosphoric acid in water(pH調到2.0 or 2.6)
我提問的這個project不是用這三種.....
請問有甚麼書籍或是收尋關鍵字是與peptides的純化有關係的嗎?
※ 編輯: ivan1209 (174.63.200.228), 10/18/2016 04:46:16
9F：→ ng0529: 蛋白質 純化 應該會連到很多，尤其某臺大人的網頁 10/18 16:22
10F：→ ng0529: 然後你需要了解 管柱特性，coating了什麼，耐酸鹼到哪，適 10/18 16:23
11F：→ ng0529: 合什麼流洗保存 10/18 16:23
12F：→ ng0529: 還有添加試劑的意義，為何調pH，這有助你在HPLC的應用。 10/18 16:29
13F：→ ng0529: 因為你沒提你的柱coating什麼，有時候鹼洗只是還原本來的 10/18 16:35
14F：→ ng0529: 官能基狀態，和除去舊有的沈積，當然拖尾就消失 10/18 16:35
15F：→ ivan1209: 好的謝謝!!我會再多看些文章的 10/22 02:10