作者awakening72 (無智亦無得)
看板Chemistry
標題[實驗] 請教HPLC如何將peak拉開
時間Wed Aug 31 13:22:05 2016
小妹就讀某國立大學
暑假在實驗室學習HPLC
使用的column為C18 ，250mm x 4.6mm
梯度用全水下去跑
打樣品出來如下圖
http://i.imgur.com/vlegt1p.jpg
請問peak要怎麼拉開
因為三根peak幾乎連在一起@@
小妹學疏短淺
感謝大家的幫忙^^
-----
Sent from JPTT on my Asus ASUS_Z00UD.
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.130.176.192
※ 文章網址: https://webptt.com/m.aspx?n=bbs/Chemistry/M.1472620927.A.968.html
1F：推 cuddi: 1. C18 column 不能用全水跑，會讓 column 死掉.. 08/31 14:21
2F：→ cuddi: 2. peak 3分鐘就跑出來，不確定你的流速，但大概是不滯留 08/31 14:23
流速是1ml/min ，column的體積為4ml(250mm X 4.6mm) 所以大概是4min後流出。
之前column充滿全水後，以ACN上升梯度5%/min分離(流速1ml/min)，也是在4min前出來，所以就改跑一樣流速的水...><
3F：推 cuddi: 可以換一根不同型態的 column 看看，如 normal phase 08/31 14:26
4F：推 blue010679: 全水要怎樣拉梯度? 一定是非極性混水啊 08/31 14:27
5F：→ cuddi: 3. 如果為已知物，建議提供一下以給予建議 08/31 14:27
6F：→ cuddi: 4. 若為未知物，可以玩的空間還很大，目前提供的線索太少 08/31 14:28
7F：推 blue010679: C18 雖然有出aqua了但還是不建議全水 如果真的都全水 08/31 14:31
不好意思還是菜鳥>< 想請問一下C18不適合打全水的主要原因是什麼?
打完也會用ACN跑過清洗一段時間。一開始準備打前都是用全水跑到穩定再打，這樣還是很傷column嗎@@ 謝謝~
8F：→ blue010679: 跑了peak還這樣的話要 要拉開只剩下流速放慢了 把流速 08/31 14:31
9F：→ blue010679: 減一半在跑一次 08/31 14:31
10F：→ blue010679: 空針的peak最好也給張圖看一下你的系統體積RT是多少 08/31 14:32
11F：→ tony15899: 起碼有4根peak 如果東西是已知物去查paper看方法 08/31 18:37
※ 編輯: awakening72 (140.130.176.192), 08/31/2016 19:41:57
12F：推 HPLC: 跑全水 C18會倒阿~~~~ 08/31 21:41
※ 編輯: awakening72 (140.130.176.192), 08/31/2016 21:41:26
13F：→ HPLC: 先看你的東西來自於哪裡 大概裡面是什麼 應該就很好判斷了 08/31 21:45
14F：推 ruby40861: sample和column親和力不夠? 09/01 11:58
15F：→ ruby40861: 全部都水應該滿傷C18 column吧 09/01 11:59
16F：推 cuddi: 水是高極性，C18是低極性，碰在一起就是GG惹~RIP 09/01 12:33
OMG@@
17F：推 blue010679: C18裡面的填料是非極性的物質 結構問題 就跟蛋白質扔 09/01 13:22
18F：→ blue010679: 進醇裡面一樣 完全相反的液體會讓結構瞬間變形 C18是 09/01 13:22
19F：→ blue010679: 非極性結構 純水是高極性 瞬間變形多多少少會有一些無 09/01 13:22
20F：→ blue010679: 法恢復久了就gg了 09/01 13:22
21F：→ blue010679: 建議20%有機 把流速放慢 09/01 13:23
22F：→ blue010679: 洗管柱最好就是50%有機洗一次 20%有機洗一次80%以上有 09/01 13:27
23F：→ blue010679: 機再洗一次 第一次就用純水還有個問題 通常C18分析的 09/01 13:27
24F：→ blue010679: 極性都不高最少比水低 純水下去 很容易在裡面結晶堵死 09/01 13:27
25F：→ blue010679: 或破壞填料結構 09/01 13:27
噢噢噢噢~~原來是這個原因，真的很嚴重啊!!! 太感謝了，不會再繼續用全水跑C18 column啦QQ
※ 編輯: awakening72 (140.130.176.192), 09/01/2016 22:12:42
※ 編輯: awakening72 (140.130.176.192), 09/01/2016 22:14:50
26F：推 scy2468: 全水或是盡量不要100%去跑會死咖冷喔～還有千萬不要逆洗 09/02 19:58
27F：→ scy2468: ，樣品跑之前一定要確定沒有雜質(或用小飛碟過濾，當然 09/02 19:58
28F：→ scy2468: 過濾可能會融出不必要的東西，這都是要做多次測試才知道 09/02 19:58
29F：→ scy2468: )。 09/02 19:58
30F：→ scy2468: 有問題可私訊 09/02 19:59
嗯嗯 好喔～會多注意一下的><
非常感謝啊啊啊！
31F：→ blue010679: 逆洗通常是你用到管柱老化要掛了 為了壓榨最後剩餘價 09/02 22:05
32F：→ blue010679: 值才會用逆洗 因為填充方向的問題 逆洗也會造成填料破 09/02 22:05
33F：→ blue010679: 壞 09/02 22:05
34F：推 ChesterYeah: 國立哪間阿？ 09/03 15:47
※ 編輯: awakening72 (114.39.122.165), 09/03/2016 20:46:21
35F：→ hadessage: 四分鐘就出來 極性又用這麼大 流速改慢 再換個溶劑 09/04 16:13