※ 引述《tony15899 (急速せんこ~)》之銘言： : ※ 引述《scy2468 (scy)》之銘言： : : 目前發現問題: : : 分析物(較親水的)滯留時間會改變，提前流出，而且時而正常時而不正常。 : : 正常時分析物的感度訊號良好與以往同 : 你的問題看起來是沒有設定層析梯度的平衡時間， : 假設方法是從20%甲醇逐漸升到100%甲醇後結束， : 當沒有設定平衡時間時，即便到下一針前pump會回到20%甲醇狀態， : 但這時間太短所以並不足以把管柱內流洗夜全部置換成20%甲醇， : (所以管柱內溶液甲醇比例會高於20%) : 當你下一次進樣後因為管柱內甲醇比例較高，波鋒會觀察到滯留時間往前移 : 解決方法是設定一段平衡時間，舉例： : 時間(mins) 甲醇比例 : 0 20% : 10 100% : 15 100% : 16 20% : 25 20% : 16~25分鐘就是平衡管柱時間，這段時間要多久不一定 : 你可以嘗試設定5或10分鐘(可能更久)，只要滯留時間不再飄移就可以 : 很多文獻方法不會顯示平衡的時間，這點要特別注意 首先就跟Tony哥說的依樣，因為你跑的是梯度，所以在設計流速時 最後要讓他回到你的初始梯度然後讓它平衡。 這時平衡的時間自己抓，不見得多久，通常是第一次在連續打， 就可以抓要平衡多久才夠。 然後這只是為了讓你每次出來的差異性不要那麼大而已， 至於你說的死柱還有14天後有差異的問題， 以我自己的經驗來說，或者說被老師罵的經驗來說， 只平衡一個小時太短了......... 建議前一天下午先安裝好正常速度流洗2小時，我當初是用1ml/min2小時， 然後調成低流速讓他OVER NIGHT，偵測器不要開喔，只是在平衡管柱....... 然後~~~~為了保險，拜託每次移動相，如果可以最好都配新的， 用固定瓶子洗乾淨>震盪>DD>溶液>震盪>裝配好的溶液>除氣 然後裝上去後照步驟慢慢洗，不要馬上裝管柱最後才洗管柱 然後電磁閥最好在剛開始時，假如你家最多可以四溶液， 最剛開始洗PUMP和混和時，筏打開，四個電磁閥都讓他動 因為經驗是，如果你只用兩個，其實另外兩個洞不夠緊， 偶爾的小氣泡還是有機會影響結果。 上面是前面 接下來說測完後，清洗部分一樣一個小時~1.5小時太短， 如果可以請盡量照說明書的清洗容量 也就是120ml~200ml左右 當然偷懶方法就是找個兩天花個時間，做完實驗低極性比例跑一次，高極性比例跑一次 跑完確定都沒東西全平，再用那個作依據來清洗， 清洗方式建議假設 水/甲醇 50/50>90/10>10/90(洗久一點) 接下來看你喜歡用哪個比例了，我會轉成100%甲醇充滿容積保存 會這樣是因為，如果你是做天然物酸鹼變化，那有時會有極少量到檢測不出來的量 卡管柱，如果真的卡管柱時間和東西都很怪， 就乖乖用水/甲醇 50/50>90/10>10/90>你的移動相比例>測一針>平衡一晚 經驗上就會好很多。 不過那個比例要自己試。 大概就這樣~~~~~ 至於為啥會卡柱，我也不懂 囧 甚至到最後，因為我做的除了出來的一個未知物外有標準品，又用光譜偵測器 老師都叫我只要比對當次實驗的滯留時間，其他的看光譜比對去判斷就好....... --

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