作者stberry (鮮紅)
看板Chemistry
標題[實驗] 有關蛋白質定量：測OD595的問題
時間Sun May 17 11:59:38 2009
在做測定BSA濃度實驗時 發現了很奇怪的現象
(這次是用Coomassie Blue R-250測OD595)
例如說 我用同樣濃度的BSA solution
第一管 取12.5μl BSA + 37.5μl稀釋液(這次用PBS緩衝液)+950μlCoomassie Blue
第二管 取12.5μl BSA + 987.5μlCoomassie Blue
結果第二管的吸光值 比第一管少了將近1/2
在我的認知裡 吸光值不是和蛋白質濃度成正比？而此兩管的濃度應該一樣
換句話說 稀釋蛋白質 到底該用溶劑？還是Dye也可以？
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 61.62.233.33
1F：推 mtdas:你的BSA溶在哪裡? 05/17 13:42
2F：推 stberry:我是使用2mg/ml的BSA標準液配的 05/17 17:22
3F：→ stberry:然後用PBS配製成不同濃度之後 取其中12.5μl反應 05/17 17:27
※ 編輯: stberry 來自: 61.62.233.33 (05/17 17:28)
4F：推 tawin:要用不含dye的溶液稀釋，在我印象中。這個方法實際上, 05/18 03:00
5F：→ tawin:是測CB以非共價鍵吸附在蛋白質的量，當CB濃度增加的時候 05/18 03:01
6F：→ tawin:也會增加蛋白質上吸附CB的量，所以在這個方法中必須維持 05/18 03:02
7F：→ tawin:每一測量管中CB的濃度 05/18 03:02
8F：→ stberry:只是如果這樣的話 第二管吸光值應該更高才是？ 05/18 21:04
9F：→ stberry:因為在蛋白質中 中性的CB變多了@@？ 05/18 21:04