第五章 藥物對於離體血管作用實驗 1.實驗簡介 藥物對於血管的作用，除了在整體動物身上觀察分析其作用外，還可以在離體情況下進行 。其原理是將動物的器官移出身體，人工地用適當的液體灌入，並以一定壓力使灌流液經 組織毛細血管至靜脈流出，以維持器官的生理功能，從灌流液的流量可反映該器官的血管 阻力變化情況。離體血管法用於分析舒約縮血管的作用原理。以觀察分析舒縮血管藥物對 血管的作用。 2.實驗目的 學習藥物對於離體血管作用的方法，觀察藥物對血管平滑肌舒張與收縮作用影響。以 alpha擬腎上腺樣受體作用劑(Phenylephrine)刺激血管平滑肌alpha受體，促使接受體依 賴性鈣離子通道開放，引起胞外鈣離子內流而致血管環收縮，alpha受體阻斷劑 (Prazosin)可阻斷此作用。逐步增加alpha受體激動劑的濃度(累積濃度)，引起血管環出 現劑量依賴性收縮，紀錄藥物量效曲線。 3.實驗材料與試劑 動物：雄性大鼠 設備：單頻道生理綜合紀錄儀組 器材：磅秤、大小剪刀、大小鑷子、1ml及10ml注射針筒、手套 試劑：KCl; Phenylephrine; Prazosin; Acetylcholine; Carbachol; Kreb’s Ringer solution; 混合氣體(95％O2，5％CO2) 4.實驗方法 (1)儀器設置 實驗裝置將張力換能器固定於微距調節器上，皆入單頻道生理綜合紀錄儀組換水槽中充以 Kreb’s Ringer solution，溫度保持37℃。 (2)標本製備 A.重度麻醉大鼠，剪開胸腔，迅速取出胸主動脈放入盛有4℃的混合氣體飽和的Kreb’s Ringer solution的培養皿中，持續用混合氣體充氣。將血管內的殘存血液洗出，並小心 剝去周邊的結締組織，然後將胸主動脈剪成5mm的動脈環數段。 B.將固定桿上的不銹鋼鉤輕輕穿入血管環，並將另一連有細線的不銹鋼鉤也輕輕穿入，固 定懸掛於裝有20ml Kreb’s Ringer solution得浴槽內。 C.血管環的初始張力調至2g，並以此張力平衡30分鐘，每15分鐘換Kreb’s Ringer solution一次。 D.用中濃度60mM KCl收縮血管環，待收縮穩定後用預熱的Kreb’s Ringer solution洗脫 ，反覆沖洗直至張力恢復至初始值為止。 E.用10-7M的Phenylephrine誘發血管收縮後，加入10-7M的Acetylcholine，觀察血管的鬆 弛效應是否超過10％，如果超過則內皮為完整的，如果沒有則內皮便是缺損或根本沒有。 接著再用Kreb’s Ringer solution反覆沖洗直至張力恢復到初始值為止。 (3)觀察結果 A.逐漸遞增Phenylephrine的濃度，紀錄動脈環收縮的累加。 B.加入10-7M的Prazosin 50μl，10分鐘後加入10-7M的Phenylephrine。 注：以上每步實驗結束後都要用Kreb’s Ringer solution反覆沖洗直至張力恢復到初始 值為止。 5.問題與討論 1.如果實驗成功做出理想結果，請寫出最大收縮力A，舒張百分比B/A，Prazosin抑制收縮 的能力(A-C)/A。 2. 打開大鼠胸腔後，心臟仍然繼續跳動，剪掉胸主動脈與髂動脈交接處時看到的噴血情 形與剪掉胸主動脈和心臟交接處時看到的噴血情形，兩者有何異同？為何會有此異同？ 3.胸主動脈內皮的作用為何？去掉了會怎樣？保留住又會怎樣？ 4.不鏽鋼鉤線要如何懸掛才會最穩也讓紀錄儀的靈敏度最高？ 5.為何通入Kreb’s Ringer solution中的混合氣體需要參入一點點CO2？若通入氣體為純 氧，又如何？ 6.加入Phenylephrine後，此血管環是等張收縮還是等長收縮？抑或者以上皆非？ 7.會不會有辦法不殺大鼠也能取得可供人類做實驗的血管？ 8.如果實驗沒有成功做出理想結果，試討論失敗的原因。 9.若沒有將胸主動脈中殘存的血液完整洗出，對本實驗會造成甚麼影響？ 10.若針筒在注射試劑時不小心射到血管環，會對紀錄儀的指針造成甚麼影響？ 11.若試劑沒有調備好濃度、沒有配好體積或者是根本就弄錯試劑，加入後會對紀錄儀的 指針造成甚麼影響？ 12.若不銹鋼線懸掛起來後，雖然直但是鬆鬆的，對實驗會有甚麼影響？ PS有鑑於助教真的很機車，還要每一個人寫的問題與討論都不一樣 所以我絞盡腦汁想出這12個問題 每個人撿個2~4個問題去寫吧，順便再自己想一個會比較不重複 最後，因為大家考試壓力都很大，所以祝大家考試加油 提醒一下 4/23交PBL和CS的心臟血管系統書面報告 4/24病理、組織跑考 4/30口醫期中考，西醫整合考試(神姊、要李、並李) 大家加油 --

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