這次由我展昭負責收。 請大家在禮拜四中午12:00前給我。 實驗3 臨床上有許多由細菌引起的疾病，在採取治療步驟之前，必須先找出致病菌， 才能對症下藥。所以菌種的分離與純種培養(isolation and pure culture) 是臨床微生物學實驗中最基本也是最重要的技術之一。近年來，細菌遺傳學及 分子生物學的研究發展中，由於細菌之基因簡單易控制，且繁殖速率快，已成為 不可或缺的材料之一。因此，如何針對不同實驗目的，選擇培養基的形態及成分， 並正確的接種，才能成功的分離、培養及鑑定細菌，即是本實驗的目的。 一、目的 1.讓同學瞭解如何針對實驗的需要，選用不同形態的培養基。 2.練習不同接種方式。 二、實驗材料 1.一般所指不同形態的營養培養基，其主要成份完全相同（如前章所述），分類 上乃依其所含洋菜膠之百分比，分為固態培養基（solid medium，約含1.5%洋菜 膠）、半固態培養基（semi-solid medium，約含0.65%~1%洋菜膠）及液態培養 基（liquid medium，又稱broth，不含洋菜膠）。 2.固態培養機可再依需要而分裝在塑膠培養皿（petri dish）稱之為平盤培養皿 （plate），或試管中，形成一斜面，稱之為斜面培養皿（slant）。 (1) 平盤培養機適用於菌種分離（isolation）、純種培養（pure culture）、 計算菌落數目（colony count）及水質檢測時的傾倒平盤法（pour plate） 等項目。菌種分離時的接種方式稱為四區劃分法（streaking method）。以 接種環（loop）取菌，先在培養基其中約四分之一部分作Ｚ字型連續劃線 後，將接種環燒紅，待冷卻後，再由第I區劃出到第II區，重覆相同的步驟， 完成第III區與第IV區的接種，個區間隔約90度角。 (2) 固態培養基置於試管中常製備成斜面，以增加接菌面積，適用於菌種保存、 運送及生化試驗。以接種環取菌後，在斜面上做蛇形劃線。另外，也可以接 種針取菌後，在斜面上做蛇形劃線，同時進行穿刺。 3.半固態培養機適用於菌種只生化特性檢驗。例如：觀察細菌發酵糖類的情形、是 否產生氣體及運動特性等現象。接種方式稱為穿刺法（stabbing method），已接 種針（needle)為工具，使用原則與接種環相同，即須先經過加熱滅菌，冷卻後再 取菌，直接插入培養積約三分之二深，再依原路徑抽出接種針。 4.液態培養基適用於瞭解細菌生長曲線圖及大量培養細菌時。接種方法可用接種環 或接種針取菌後，直接伸入培養基中，輕輕攪拌（stirring）即可。 5.菌種：金黃色葡萄球菌，標記為"S"。大腸桿菌，標記為"E"。 三、實驗內容 1.每組分得： (1)一片平盤固態培養基 (2)兩管斜面固態培養基 (3)兩管半固態培養基 (4)兩管液態培養基 2.依上述之接種方式進行接種，再放入37度Ｃ的培養箱，隔夜培養。 四、注意事項 1.做平盤固態培養基接種時，蓋子半開，或靠近酒精燈周圍，以免空氣落菌影響結果。 2.做試管內接種時，接種環或接種針不可碰到管口，以免雜菌汙染。 3.計算菌落數目時，一個平盤中以目視30~300個菌落為適當的濃度，若數目過多，應 加以稀釋再做。 4.觀察液態培養基結果之前，需搖晃試管後，再判讀，以免因菌體沉在試管底部而誤判。 5.以半固態培養基培養後，若發現細菌生長如刷子狀，須以顯微鏡觀察或做鞭毛染色後， 才能確定其運動性的存在。 五、結果記錄 1.描述細菌在不同培養基的生長情形。 2.比較金黃色葡萄球菌與大腸桿菌的生長情形。 3.描繪菌落出現的情形及形態 六、問題與討論 1.如果以液態培養基培養，得到細菌生長情形與時間只關係圖如下，請就1、2、3、4部分 解釋之。 2.影響細菌生長的環境因素有哪些？ -- 好的旅行家，如你，是亦行亦止的， 因為只有『行』，才能去到遠方， 只有『止』，才能凝神傾聽，才能渙然了解，才能勃然動容， 然後，才有瑣細入微的記憶和娓娓道來的縷述。 --張曉風 送你一個字-- --

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