作者fideleo (fideleo)
看板Biotech
標題Re: [閒聊] 關於PCR的一個步驟
時間Thu Dec 20 10:04:47 2007
※ 引述《leondemon (狗狗)》之銘言：
: PCR反應的熱循環之後
: 通常會在4度C之前 再加一個72度C 7分鐘
: 請問這個用意何在呢？？ 我一直無法理解....
: 大學時聽過不同老師的兩個說法：
: 1.為了使Taq失活，因為加熱過久耐熱的Taq一樣會失去活性
: 2.為了使最後一個循環合成完全
: 大部分都聽到第二種說法，但實際上兩種說法我都難以接受
: 因此想問問看是否有paper解釋PCR中 加上此步驟的真正理由為何？
: 或是大家有聽到何種說法？
一時之間我想不起來自己是在哪看到的
不過 我所知道的是
多增加那一個步驟
可以更確保你大部份的 PCR product 在其兩端 都有 sticky A
如果你的 PCR product 是那種 size 很大的
然後你之後又要拿那個產物進行 TA cloning
增加這個步驟 應該是除了讓一些可能為未完成的反應完成
也可以盡可能地讓更多的產物的有 sticky A
使更多產物可以進行下一個 TA cloning 的反應
另外 也有一種情況是
如果你有一個 blunt end 的 DNA 片段
你想把它弄到 T-vector 裡面
你可以用這一個步驟 在 blunt end 的兩端 加上 sticky A
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1F：推 leondemon:給個推~! 12/22 01:04
2F：推 cutebetty:我知道的也是這理由 12/23 03:19
3F：推 yaliu:實驗室同學給我理由是要讓它做的完全，但是感覺不怎麼通 12/23 15:51
4F：→ yaliu:你的理由，我能接受，蠻有道理的XD 12/23 15:53