※ 引述《[email protected] (新的開始)》之銘言： > 嗯，我有想過假設三個是同向的話 > loxP ExoA loxP ExoB ExoC loxP ExoD > 有可能的結果是，先delete ExoA，這時ExoB旁還剩一個loxP site，因此發生 > 第二次recombination，把ExoB、C一起殺掉，只剩ExoD > 或先delete ExoB、C，再把ExoA砍掉，一樣只剩ExoD > 或更直接，最兩端的loxP重疊，一次把中間的ABC全刪了，剩ExoD > 所以同向代表一個很大段的deletion? > 那如果有正向跟反向就沒辦法產生這樣的結果啦，例如上述例子，方向是正、正、反 > 如果先作用的是Exon BC兩端的loxP，則會變成anti-ExoC anti-ExoB， > 再來是第一個loxP正向，第二個loxP正向，發生deletion，所以剩 anti-EC anti-EB ED > 但還有一種可能是變成anti-ExoC anti-ExoB後 > 再來是第一個loxP正向，第三個loxP反向，再發生一次invertion，變成 > ExoB ExoC anti-ExoA?? > 因為這樣就會有錯誤(不只一種結果) > 所以我認為我的想法是錯的，不知道版主大大指的排列組合是什麼意思?? > ※ 引述《sancra (新的開始)》之銘言： > : 【問題】：3個loxP 會造成什麼結果 > : 【問題起因】：老師問的 > : 【個人看法】： > : 我知道Cre-loxP的技術 > : 一個loxP sites會產生insertion > : 二個同向的loxP sites造成deletion(knock out) > : 二個反向的loxP sites造成invertion > : 不過那三個loxP會怎樣，無法想像，是隨機delete嗎? > : 還是會generate三種knock out construct? > : 希望版上各位高手回答，或是告訴我參考資料來源，讓我自己看也行 > : 謝謝!! 排列組合的意思就是您最上面所講的 隨機剔除任兩個loxP site 所包夾的區域 這也是早先做condition knockout所用的方法之一 將ES cell 送入此一剔除載體後 先經正負選以篩選出已發生重組的細胞 再送入Cre表現載體 讓它隨機剔除lox P site所包夾的區域 會這樣做是希望可以先剔除正選擇所用的抗生素基因 而暫時保留原本的基因片段(exon) 而不是直接剔除整段基因(因有些基因一旦失去可能就會造成胚胎死亡) 最後再與組織專一性表現的Cre交配 以得到在特定組織內剔除特定基因的老鼠 不過要拿到自己想要的clone機率有點低 要多挑幾顆才會拿到想要的 不過現在的做法已經可再搭配另一種剔除酵素及序列 不用再花時間去篩選 starch -- ┌┼ Origin: 國立台灣海洋大學˙海大計中 bbs.ntou.edu.tw └┘ Author: starch 從 140-109-227-221.adsl.sinica.edu.tw 發表