作者KaurJmeb (寫條目送批幣？)
看板Biology
標題Re: [問題] 藍白菌篩選
時間Wed Mar 26 02:13:29 2008
※ 引述《phcwc (呆呆)》之銘言：
【問題】：藍白菌篩選挑出有重組DNA的轉型細菌
【問題起因】：我做出來的結果是一刻都沒長,連藍菌都沒有
想知道有哪些原因會造成這種結果
【個人看法】：想說可能是plasmid不夠,或是操作中的人為疏失
想知道說是不是還有其他的可能
我這次用的plasmid是pGEMT和pGEMT-PCR
藉由pGEMT上的lacZ來表現出藍白菌
希望各位可以幫我解答
謝謝^^
1F：推 dankai:換一批菌養! 你目前的菌我認為活力可能已經降低~ 03/26 00:42
2F：→ dankai:原本的保菌過程中可能出問題!! 03/26 00:45
3F：推 KaurJmeb:從哪步驟開始做的？ligation? transformation? 03/26 01:04
4F：→ phcwc:是從ligation開始 03/26 01:36
那就從ligation開始討論吧。
問題1：接入的DNA序列是實驗室有人做過的，還是新的？
問題2：如果是新的，有送定序吧？(前後接頭的序列對嗎？)
問題3：如果定序沒錯，可以檢查/調整一下ligation的條件(溫度、時間、濃度.....)
然後用原批菌做transformation試試看。
問題4：這批菌是否像dankai所說活力降低？如果要換菌做，可和上面平行做一批，
如果確定是菌的問題，剛好可以把該批菌銷毀。
問題5：transformation的常見操作問題，送入competent cell過程太粗暴，
塗菌時過火消毒的塗菌棒溫度太高，培養基的抗生素選錯.....
我想到這些可能的問題。
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5F：推 phcwc:謝謝你!!! 03/26 08:52