作者latte366 ( )
看板Biology
標題[問題] buffer pH值 會怪異的上升!!
時間Thu Feb 28 02:40:18 2008
※ [本文轉錄自 Biotech 看板]
作者: latte366 ( ) 看板: Biotech
標題: [問題] 關於配SDS-Page Gel的tris-base buffer 的PH值問題
時間: Thu Feb 28 02:31:08 2008
關於配western的SDS-Gel 的buffer (濃度皆為1M)
配stacking gel (上膠) 的 tris-base buffer pH為6.8
配running gel (下膠) 的 tris-base buffer pH為8.8
問題來了
最近忽然想到這兩種buffer回不會像養細胞的medium一樣
配一段時間 隨著暴露空氣的時間頻率增加 pH值會會來越高
於是 拿著四個月前配的這兩罐buffer去重測pH值
果然 配上膠的 pH 從 6.8 --> 7.6
配下膠的 pH 從 8.8 --> 9.4
我給自己的解釋是 雖然都有冰4度C冰箱 不過或許是放太久吧
沒關係! 立刻重配
配完之後 看著pH meter 顯示 6.8 與 8.8 爽!!
馬上用新的buffer做兩片膠來跑
等膠凝的過程
不曉得哪根筋又不對 又拿著這兩罐buffer再去測PH值
重點來了!!
pH居然又升高了 6.8--> 7.2
8.8--> 9.1
疑惑的當下 拿起手邊的HCL (6N)做滴定 (用濃的是怕體積改變太多影響Tris濃度)
OK 沒兩下滴定回原來pH 可是當我拿起罐子搖一搖 再mix
再重新測PH 神奇的是 pH值又上升了!!!!
我是沒有測一直搖一直搖 它可以上升到什麼樣的程度啦
不過我猜 到一定的程度後應該就會停下來 (不然就爆表啦!)
補充:
1.不大可能是藥品壞掉 因為學長姐們也適用同一罐配 雖然他們第一次測完pH後
就再也沒再測過 不過western也還是順順的跑阿
2.HCL也不大可能有問題 從12N會冒煙的那種熱騰騰配好的 聞起來很新鮮阿! XD
3.pH meter壞掉的可能性也很低 測MQ純水 pH沒問題 而且搖一搖 晃一晃
pH也不會升高
4.glycin-base 有完全溶解了 stir-bar讓它轉滿久的 至少我肉眼看不出有沉澱
所以應該也不是配成過飽合的沉澱導致
話說pH可以變了又變 變了又變嗎?
我已經在考慮要不要以後做的時候都現配了......Orz
請問各位前輩有類似的情形嗎?
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◆ From: 140.116.93.52
※ 編輯: latte366 來自: 140.116.93.52 (02/28 02:38)
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1F：推 vixen:Tris的pH與溫度很有關係,你量的時候是否考慮溫度變化? 02/28 06:01
2F：→ vixen:Tris在溶解時吸熱,調整pH時因酸鹼中和又放熱,一定有溫度變化 02/28 06:02
4F：→ latte366:感謝前面兩位 讓我長了知識 的確是溫度的問題沒錯 02/28 11:20
5F：→ latte366:原來我在第二次之前 有先把兩罐放4度C冰箱 02/28 11:22
6F：→ latte366:之前的buffer也都是放冰箱保存 而且都沒等他回溫就測 02/28 11:22
7F：→ latte366:難怪pH一直都是上升的 搖一搖後 即使滴定放熱 也被 02/28 11:23
8F：→ latte366:血清瓶的溫度中和 溫度又降低 pH又升高 難怪一直覺得 02/28 11:25
9F：→ latte366:怎麼都用到6N HCL了還這麼難滴定 再次拜謝~~~ ^^ 02/28 11:26