看板Biology
標 題Re: 細胞抽protein的方法
發信站木棉樹 (Sat Jun 9 13:40:54 2007)
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※ 引述《[email protected] (燃燒我的小宇宙)》之銘言：
> 想跟大家交流一下，
> 因為最近抽蛋白抽的很痛苦，跑wb看不到預期的band...
> 我要看的蛋白再細胞核內，
> 用自己實驗室抽蛋白的方法一直抽不好，
> 不曉得大家抽蛋白會不會sonication?
> 還是會加triton呢?
> 先謝謝各位了!!~
你應該附上你們實驗室的lysis buffer成份或是方法步驟
另外，請先確定是不是Western blotting的問題
positive control和negative control都如預期嗎?
可能的話，跑膠時拿個別人做過ok的lysate來當positive control
若真的發現是處理cell lysate時的問題
原則上用含SDS或Urea的buffer再加上sonication或是boiling處理就很完全了
有的實驗室用非常mild的lysis buffer做例行性protein extraction工作
但是根本沒考慮到你想看的protein有可能在過程中都弄掉了
你參考一下囉~
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