作者firelf (火靈)
看板Biology
標題[問題] PCR 出現兩倍大小的product
時間Tue Aug 22 18:45:30 2006
我在做clone的動作 PCR則是最後的簡易篩選
之前學長已經將target (約0.5k)送到 pGEM T easy 上
並送入E.coli中保存
我要將target gene送入pQE30 中
於是 pGEM-target pQE30
↓ culturing ↓ culturing
culture culture
↓ extract plasmid ↓ extract plasmid
plasmid plasmid
↓ PCR target sequence │
↓ PCR clean up │
target gene │
↓ double digestion ↓ double digestion
↓ PCR clean up ↓ PCR clean up
└──────┬─────┘
↓ligase
↓electroporation
pQE30-???
screening:
pGEM-target (positive control)
pQE30 (negative control)
pQE30-??? (test)
extract plasmid -> PCR -> run agarose gel :
Ｍ Ｐ Ｎ t1 t2 ...
┌─────────────────┐
1.2k│ ▃ │
│ │
│ │
1.1k│ ▃ │
1.0k│ ▃ ▁ ▁ │
0.9k│ ▃ │
0.8k│ ▃ │
0.7k│ ▃ │
0.6k│ ▃ │
0.5k│ ▃ ▅ ▅ │
└─────────────────┘
所以
1.0k左右的東西, 可能是?
t1, 應該可以用吧?
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會這樣post 是因為 我在發洩...
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◆ From: 134.208.24.93
1F：推 HEYHEYHEY:看你的PRIMER是什麼呀？ 132.229.209.10 09/01 18:17