作者KLAHA (Scars of sabbath)
看板Biology
標題Re: [問題]關於抽質體DNA的問題
時間Tue Feb 17 20:42:55 2004
※ 引述《citrinin (anticitrinin)》之銘言：
: ※ 引述《wwwjjj (......)》之銘言：
: : 在下是剛進實驗室的新手
: : 目前還是大學生
: : 想請問各位大大
: : 抽plasmid DNA的步驟中
: : 在加入各種buffor,靜置..........
: : 之後有一個步驟:離心後取澄清液
: : 上面的解釋說此澄清液含有plasmid DNA
: : 而沉澱物則包含了genomic DNA, proteins, cell debris, SDS ...
: : 我想請問的是genomic DNA不是細菌除了plasmid外的DNA
: : 兩者同樣是DNA只是大小.形狀的不同
: : 為什麼plasmid DNA會溶解而genomic DNA卻會沉澱下來
: : 不知道這樣形容會不會很模糊
: : thank you:)))
: 一個牛津大學的博士告訴我是被 protein 給'絞'進去的
聽你說法應該是用alkaline lysis
離下菌,去掉broth
soln 1 : GTE
菌的等張液,維持菌的完好
務必使菌完全懸浮
加soln 2：SDS和NaOH
SDS=detergent,破菌
NaOH=使DNA變性(denature),由雙股打開為單股型式
混勻即可,切勿劇烈混合使genome DNA斷裂
加soln 3：加酸(我用醋酸鉀)
中合soln2,務必混合均勻
此時plasmid DNA因片段較短,馬上renature
但genome DNA片段較大,不及馬上renature
離心,捨去懸浮(lipid)&沉澱物(protein,genome DNA等),取出液體
加入100% EtOH沉澱,離心
去除上清液(有genome DNA)
留pellet=plasmid DNA
以70% EtOH wash
乾燥後得plasmid DNA,
溶於適量水或TE buffer內
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 61.222.64.102
1F：→ enisx:不用過phenol/chloroform ? 推 140.112.25.191 02/17
2F：→ KLAHA:技巧高超的如我學姐不必過 *笑* 我有時要 推 61.222.64.102 02/17
3F：→ isotoper:能請問樓上是大學還是研究生嗎? 推140.112.240.226 02/17
4F：→ KLAHA:碩一 XD 推 61.222.64.102 02/17
5F：→ isotoper:難怪有背~~好恐怖喔>_<" 推140.112.240.226 02/17
6F：→ eyespot:solnII,III加完才離心吧? 推 140.112.25.165 02/17
7F：→ agbug:實驗不用背啦,看步驟做就好,原理比較重要 推 218.163.121.42 02/18
8F：→ HXZ:做久的自然都會記起來 推140.112.213.171 02/18
9F：→ zerpher:應該是plasmid 在PH12.0-12.5不denature吧 推 210.202.68.176 02/18
※ 編輯: KLAHA 來自: 140.112.234.180 (02/19 13:24)