作者genewing (Go~~Go~~)
看板Bioindustry
標題Re: [問題] 請教研究助理轉職的跑道？
時間Sat Nov 29 19:36:45 2008
※ 引述《kaede178 (愛愛愛)》之銘言：
: 但是比起外面的私人公司來講
: 學校老闆的要求和期待真的非常客氣了
: 私人公司常常也是朝令夕改
你以為 PI就不會朝令夕改嗎??
我的老闆還很天兵的
要我一個細胞裡同時transfect 兩個plasmid
一個是target gene 另一個是EGFP(當篩選marker) 白癡到極點
: 因為花錢的是老大,你不滿意就自己走人
你以為 PI就不會叫你走人嗎??
我的老闆 每天跟我靠腰說 助理六日也要來做實驗
: 想投訴嗎?唉,在人屋簷下不得不低頭
: 我以前實驗做的好,老闆說:不錯,繼續保持下去
: 現在業務做的好,老闆說:明年你要更好,做不到就等著...(難怪辦公室人人健檢都是紅字)
: 以前實驗遇到瓶頸,老闆說:加油,再撐一下,做出來我們這篇可以發5點的paper,慶功.....
你以為 PI就不會對你說"今年要發2點,明年要發5點,後年要PNAS"
"助理一年沒有paper 就等著..."
: 相對外面工作,現在景氣這麼差,被老闆盯的滿頭包
這與是不是當助理無關
只能說 你遇到了一個爛人
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.109.50.106
1F：推 arsenate:我以前在中研院生醫所的老師 就常常恐嚇助理 11/29 20:29
2F：→ weisheng0518:Co-transfection 不對嗎？挑 clone 很麻煩就是了... 11/30 11:09
3F：→ topyshiin:我也想知道為什麼不能co-transfection 11/30 16:26
一個 plasmid 是target gene
另一個plasmid是EGFP當 marker用
轉基因完後 用以第二個plasmid當marker用flow去挑帶有target gene的clone
這是個很爛的點子...
※ 編輯: genewing 來自: 140.109.50.106 (11/30 18:02)
4F：→ blence:如果沒有marker這樣並沒錯,重點是這樣就罵這老闆白癡著實? 11/30 18:43
也罷..我覺得你完全沒有相關的實驗經驗...
用白話文說
要marker的話 最基本的 至少應該將EGFP與target gene接在同一個plasmid上
(但是實務與理論還是兩件事......)
這點技術 只要是有點分子生物學背景的人 都知道該怎麼做
完全沒有技術難度...
我老闆只是單純連一個星期的工作時間都不願意等而已
※ 編輯: genewing 來自: 140.109.50.106 (11/30 20:45)
※ 編輯: genewing 來自: 140.109.50.106 (11/30 20:59)
5F：→ blence:你肯定錯了,許多沒有marker的,會用co的方式選好比例送進去 11/30 21:15
6F：→ blence:當然paper也這麼做過,不需要額外接clone 11/30 21:16
7F：→ blence:這麼快就對老闆或別人下定論,在別人眼裡看來就十足像個新手 11/30 21:25
8F：→ weisheng0518:EGFP 跟 target gene 都用同樣的 promoter的話, 11/30 22:34
9F：→ weisheng0518:重新 construct 很快沒錯。 11/30 22:36
10F：→ weisheng0518:如果一個是 pol II 另一個是 pol III, 麻煩點.... 11/30 22:38
11F：→ weisheng0518:不過中研院有錢，去買就好了 11/30 22:39
12F：→ genewing:B大如果覺得可行...那您就用這方法做好了... 12/01 04:58
13F：→ genewing:與其用啥鬼marker target gene有沒有真正的進入genome 12/01 05:00
14F：→ genewing:然後表現 才是重點..... 12/01 05:00
15F：→ genewing:用Co-transfection 最大的問題在於 12/01 05:01
16F：→ genewing:你無法證明 "有螢光就代表有target gene" 12/01 05:01
17F：→ genewing:b大你有辦法證明這點...我才相信你真的有做過實驗 12/01 05:02
※ 編輯: genewing 來自: 140.109.50.106 (12/01 05:04)
18F：→ genewing:補充一下 我們要的是 能穩定產出target protein的細胞 12/01 05:08
19F：→ genewing:同一個plasmid上接EGFP 加 target gene.... 12/01 05:19
20F：→ genewing:最後有發螢光的細胞 都沒有target gene了 還co-transfect 12/01 05:20
21F：→ genewing:只能說b大你是天才中的天才.... 12/01 05:21
22F：推 kitiara:老實說我也看過這種方式 這只是當做初步篩選的方法 12/01 09:09
23F：→ kitiara:就算你用同個Plasmid上的EGFP去挑clone 還是得養好幾株 12/01 09:10
24F：→ kitiara:細胞挑Stable Clone 這樣跟co transfection一樣還是得經過 12/01 09:12
25F：→ kitiara:蛋白表現量的篩選 所以省去Construct過程也是可以的 12/01 09:13
26F：→ kitiara:風險是可能得挑很多的Clone來篩 但也有去除EGFP可能造成 12/01 09:14
27F：→ kitiara:的干擾的好處 12/01 09:15
28F：推 evergreen215:co-trans只適合transient expression分析.. 12/01 09:27
29F：→ evergreen215:一般多用來做promoter assay用,若要做stable protein 12/01 09:29
30F：→ evergreen215:expression的方式絕不是用這種半吊子的方法XD 12/01 09:30
31F：→ evergreen215:市面上許多expression system都有flag..為何不用? 12/01 09:32
32F：→ genewing:所以我說這是爛方法 而co-transfect 更爛...... 12/01 09:41
※ 編輯: genewing 來自: 140.109.50.105 (12/01 09:43)
33F：→ genewing:e大說的是IRES系統吧 那個也有試過............結局... 12/01 09:45
34F：→ evergreen215:我不是說IRES,那個東西會有protein turn-over不一的 12/01 09:51
35F：→ evergreen215:的問題,總之用一般的shuttle vector都不是好方法.. 12/01 09:51
36F：→ evergreen215:主要看貴Lab著重於蛋白質產出或分析用,面向方法不同 12/01 10:03
37F：→ genewing:完全不加marker的方法 也有試過.但是事後驗證太耗時... 12/01 10:23
38F：→ genewing:target gene 轉進去的機率又太低了..... 12/01 10:24
39F：→ genewing:現在是加tol2系統提高轉基因的效率... 12/01 10:25
40F：→ cothuho:可以看得出您在transfection上很多經驗 你老闆真幸運 12/04 11:39
41F：→ genewing:不...是實驗室很不幸的繞了很多遠路 我只是順便學經驗... 12/04 22:02