原文網址:http://ibs.ntu.edu.tw/news/newsDetail/345 臺大團隊解開DNA複製修復機制研究成果發表於《Nature Communications》 DNA複製對生物的發育、個體生長，和器官維持細胞數目的恆定所不可或缺。如果DNA複製 發生錯誤，會導致基因突變而造成細胞變異，甚至演變成癌症。因此細胞發展出一套保護 機制，當DNA複製過程中，遇到DNA損傷或因種種複製壓力(Replication stress)造成阻礙 時，複製叉(Replication Fork)會進入停滯狀態，並轉變成反轉複製叉 (Reversed fork) 的特殊DNA結構，藉以保護停滯的複製叉因而崩裂瓦解。同時，細胞內RAD51重組酵素會聚 集至損傷處，在反轉複製叉的單股DNA上，形成核蛋白絲(RAD51 filament)聚合物，去保 護新合成的DNA，不被核酸分解酵素(Nuclease)降解，並協助重新啟動DNA複製。然而，在 整個反應過程中，因細胞含有大量的RPA蛋白複合體，因其對單股DNA有高度結合力，會阻 礙RAD51和單股DNA結合。因此對於RAD51核蛋白絲在反轉複製叉上形成的調控機制，仍有 許多未知。 在先前的研究中，我們發現CST蛋白複合體(CTC1-STN1-TEN1)具有保護反轉複製叉及調控 RAD51的角色。而在本篇研究，藉由團隊以不同專長及互補的技術，從細胞層次、蛋白質 與DNA生化功能分析、及單分子觀測量測，我們闡明了細胞在複製壓力下的精細的調控機 制。在細胞的影像實驗，我們觀察到在複製壓力下，RPA跟CST蛋白二者會共同聚集在停滯 複製叉上。而本篇第一作者李啟恆博士，利用多樣化的蛋白表達系統及蛋白純化的策略， 成功純化出高純度的CST、RPA，和RAD51重組蛋白，進一步來分析它們相互作用的生化特 性。研究結果顯示，CST和RPA蛋白能共同結合在相同的單股DNA上，並且CST和RAD51有直 接的蛋白和蛋白交互作用，因此CST可以把RAD51帶到有RPA結合的單股DNA上。同時，共同 第一作者楊翰霖碩士也利用單分子螢光實驗，進一步證明CST跟RPA的確是共存在同一條單 股DNA上。我們的研究也闡明了RPA和CST這兩個具有多個OB摺疊結構域(OB fold domain) 的蛋白，藉由它們不同DNA結合力的OB摺疊結構域，彼此間競爭來達到兩個蛋白可以共存 在同一個DNA分子上（圖一）。由於細胞中大量的RPA阻礙了RAD51結合到反轉複製叉上， 而透過CST和RPA共存的能力，可以協助RAD51在聚集在DNA形成核蛋白絲，進而促進後續 DNA複製修復 （圖二）。 CST的突變會造成生長遲滯、骨髓衰竭、神經性病變、肝纖維化，癌症等疾病，本篇研究 發現了CST在DNA複製上的重要角色，闡釋了造成這些疾病的可能成因，對於未來的診斷和 治療上提供更多資訊。另外，癌症由於其快速生長的特性，會累積很多DNA複製壓力。若 檢測出這些癌症中帶有CST突變，無法正常修復DNA複製壓力，則可以針對這一類癌症處理 造成複製壓力的藥物，達到標靶治療的效果。 ． 論文全文現已發表在Nature Communications，本次的研究成果，再次顯示跨領域的團隊 合作重要性，藉由研究專長的互補，除了加速研究的進行，也可由不同角度的思考，能將 問題探討的更加深入。此研究工作是由科技部計畫、臺大，及中央研究院支持下進行，論 文參與的人員有臺大生化所冀宏源教授團隊（李啟恆、張皓衍、葉欣怡），台大化學系李 弘文教授團隊（楊翰霖、李子于），以及美國Weihang Chai教授團隊(Dinh Duc Nguyen, Xinxing Lyu, Megan Chastain)共同完成。 --

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