※ 引述《afa》之铭言： : 作者: afa (我是可爱的马铃薯) 看板: NTUAC92 : 标题: 大家看看吧 : 时间: Sun Jan 11 01:09:08 2004 : ※ [本文转录自 NTUBST92 看板] : 作者: afa (我是可爱的马铃薯) 看板: NTUBST92 : 标题: 通缉清河!! : 时间: Sun Jan 11 01:02:25 2004 : 抱歉..借用系版一下^^" : --- : 清河 假如你还在线上的话... : 你可不可以帮我看一下这个.. : ---- : Direct sequencing的目的如下.. : 为了要了解无法在实验室中培养的细菌，利用此技术配合演化树，寻找此种细菌 : 与目前已知的哪些细菌相似.. : [稍微翻一下而已啦..有一点错的话不要太计较^^"] : Direct sequencing的流程如下.. : 1.从土壤或水中取sample : 2.将细胞溶解&作DNA purify : 3.用"广泛的"(universe)rRNA基因的primer 将purify後的DNA作PCR : 4.将PCR後的DNA purify後并分类 : 5.将分类後的DNA分别注入E.Coli中 : 6.待E.Coli大量繁殖後 取出plasmid再跑电泳 : 问题如下.. : 1.第4步时的purify是不是要将制造rRNA基因特别分离出来?不然为什麽要再purify一次..? : [我真的忘了耶..PCR後要再作一次purify吗?] 我的想法阿 第二步的purify是把DNA跟其他细胞质的东西分离 而在第四步的purify是分离出不同的片段 : 2.为什麽要特别将这段DNA放入E.Coli里面??用意是什麽?? : 假如只是要放大DNA的话..直接用PCR跑就好啦 跑多久就有多少.. : 是因为PCR的错误率高?[好像有听说过这件事..但是我不确定..>"<] : 我想了很久耶..>"< 可是还是不会><" 我记得...做PCR的时候 要放入人工的引子 才能开启复制叉 进行复制 所以...PCR复制一遍的量 好像是有限的 就是一次只能复制你所给引子的量的DNA 所以用PCR跑到一定量的DNA之後 再分离 放进大肠杆菌之後 大肠杆菌繁殖的速度很快 不用很久的时间就可以有很大一缸的DNA可以用了吧 嗯...这是我的猜测啦 哈哈 不知道对不对 : --- : purify应该是一定要的..因为要把杂质弄掉..我後来才想起来.. : [我们做完PCR应该有做purify吧..我真的忘了..||] : 第二个问题呢..强者董认为PCR的确错误率比较高 : 不知你有什麽看法?? : --- : 欢迎大家一起讨论~~ 不过我没听过说PCR错误率比较高这件事ㄝ..求证之後告诉我一声好吗 拜托啦 谢谢 多学一课 --

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