最近在看的，学弟妹们可以看一下喔，应该是未来的趋势了 来源网址 http://highscope.ch.ntu.edu.tw/wordpress/?p=55722 「DNA编辑大师」张锋与CRISPR/Cas9基因编辑技术（上） Posted on 2014/08/26 in 分子生物, 生命科学, 生物科技, 遗传工程 国立台湾大学医学院生理所林世青专任研究助理 麻省理工学院的张锋（Zhang Feng）教授凭藉其发展的CRISPR（Clustered, Regularly Interspaced, Short Palindromic Repeats）/Cas9（CRISPR-Associated Protein 9）系 统，年仅32岁即荣获2013年《自然》杂志评选之年度新闻人物首位，并获得「DNA编辑大 师」之称号（"365 days: Nature's 10," 2013）。 究竟这令人折服的基因编辑技术的发展过程为何呢？西元1987年时，科学家在细菌内发现 一种特殊核酸内切酶，命名为CRISPR/Cas9，其会辨认外来的DNA并加以切割降解，被认为 是细菌用以抵抗病毒感染的防御机制（Ishino, Shinagawa, Makino, Amemura, & Nakata, 1987; Bhaya, Davison, & Barrangou, 2011），若能在病毒感染的第一时间内 就将其DNA降解，即可有效阻止病毒复制。 而到了2012年时，科学家解开了Cas9对於目标DNA的辨认机制，并成功藉由人工方式修改 其专一性，让整个技术有了飞跃性的突破。其发现Cas9会与其导引RNA（small-guiding RNA）结合後得到辨认目标序列的能力，从而结合并切割目标DNA，科学家只需要修改导引 RNA的序列，即可改变Cas9的专一性，命令其转而裁切另一不同序列的DNA（Jiang, Bikard, Cox, Zhang, & Marraffini, 2013; Jinek et al., 2012）。过去使用的基因剔 除技术：锌指核酸酶（zinc-finger nuclease, ZFN）或TALEN标靶基因剔除工具等，都必 须经由繁复多步骤的基因工程，拼装出能够辨认目标序列的蛋白区位，才得以用来辨认并 切割特定序列（Gaj, Gersbach, & Barbas, 2013）。相较之下，因合成特定序列DNA或 RNA的技术较拼装重组蛋白更为成熟且有效率，仅需数日便可得到特定序列产物，令 CRISPR/Cas9的实行上较ZFN或TALEN更为方便快速。 张锋教授的重大贡献之处，即在於将本来不起眼的CRISPR/Cas9的细菌免疫系统改造成为 一套简单廉价的基因改造工具（Hsu, Lander, & Zhang, 2014），并发现这套系统可以被 用於原核或真核细胞的基因编辑，使得我们可以很简单地自行在实验室编辑各类常见模式 生物，包括酵母菌（DiCarlo et al., 2013）、线虫、果蝇（Kondo & Ueda, 2013）、阿 拉伯芥、斑马鱼、小鼠、大鼠、乃至人类细胞的基因（Sakuma, Nishikawa, Kume, Chayama, & Yamamoto, 2014）。 CRISPER/Cas9 基因编辑流程：Cas9含有两个内切酶作用位，当作用DNA与特定序列之导引 RNA结合後，Cas9可同时切割该处双股DNA，造成DNA断裂并启动细胞本身的修复机制，此 时有一定机率会使用人工给予的外来模板修复该处，达到基因修饰目的，由此方法可建立 基因修饰之各种模式生物，或往後应用於基因疗法。（来源：作者自绘 ） 文献连结 Development and Applications of CRISPR-Cas9 for Genome Engineering https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4343198/ 其他有兴趣的自己找罗~ --

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