http://72.14.253.104/search?q=cache:XEIt2xkc9jIJ:www.huanjing65.com/viewthread.php%3Ftid%3D4201+%E6%A4%8D%E7%89%A9%E7%B4%B0%E8%83%9E%E8%86%9C%E7%A0%B4%E7%A2%8E%E6%B3%95&hl=zh-TW&ct=clnk&cd=3&gl=tw 目的要求：了解和掌握各种样品样品的粉碎技术，包括土壤、植物、动物、肥料、食品、 饲料的粉碎及注意要点。学习样品粉碎的常用方法等知识。 学习要点：各种常规样品的粉碎方法。 技能培训：土壤、生物、肥料、食品、饲料等样品的粉碎。 　 样品检测前一般都要进行粉碎，目前常用的方法主要有组织捣碎法、粉碎机打碎、提取液 研磨、液氮研磨等几种方法。不同的样品根据测定项目的不同选择不同的粉碎方法。植物 样品粉碎如叶、嫩茎等可用液氮研磨法。 新鲜的瓜果类样品、动物样品如需取样後直接测定，可用组织捣碎机直接粉碎。已乾燥好 的植物样品用粉碎机直接粉碎即可。土壤样品粉碎分为粗磨和细磨，涉及到的具体工具会 在後面详细讲述。在测定新鲜植物组织中的叶绿素等项目时，加入提取液後可直接研磨至 匀浆状。 一、土壤样品的粉碎 1、粉碎用工具： 粗粉碎用木锤、木滚、木棒、有机玻璃棒、有机玻璃板、硬质木板、无色聚乙烯薄膜；磨 样用玛瑙研磨机（球磨机）或玛瑙研钵、白色瓷研钵；过筛用尼龙筛，规格为2～100目。 2、样品研磨 野外采回的土壤一般叫作原样土，原样土分为岩屑（>2 mm）部分和细土（<2 mm）部分。 原样土经风乾後需磨碎处理制备成待测土样。磨碎前要把岩屑、侵人体及粗有机物捡除， 并把岩屑部分称重。细土部分则先用手或木棍等压碎，有时也用相应的机械粉碎。但不宜 磨得过细，通过2 mm筛孔的细土部分用做土壤物理和化学性质分析。不同分析项目要求用 通过不同孔径，一般物理性质和速效养分等多用通过2 mm（10号筛）样品，而全量分析则 多用通过0.149mm（100号筛）土样。需进一步磨细的土样可分取已通2 mm的土样进行，但 分取时必须用四分法或多点取样法分取，并使全部通过需磨细的筛孔，不得随意弃去不能 通过部分。进行微量元素分析的样品不能使用铜筛或铁筛。样品可用玛瑙、瓷研钵研碎或 用玛瑙、不锈钢的磨粉碎，然後过尼龙筛，以免污染。 ?　样品粗磨 在磨样室将风乾的样品倒在有机玻璃板上，用木锤敲打，用木滚、木棒、有机玻璃棒再次 压碎，拣出杂质，混匀，并用四分法取压碎样，过孔径0.25mm（20目）尼龙筛。过筛後的 样品全部置无色聚乙烯薄膜上，并充分搅拌混匀，再采用四分法取其两份，一份交样品库 存放，另一份作样品的细磨用。粗磨样可直接用於土壤pH、阳离子交换量、元素有效态含 量等项目的分析。 ?　样品细磨 用於细磨的样品再用四分法分成两份，一份研磨到全部过孔径0.25mm（60目）筛，用於农 药或土壤有机质、土壤全氮量等项目分析；另一份研磨到全部过孔径0.15mm（100目）筛 ，用於土壤元素全量分析。 样品在粉碎及贮存过程中，常会吸收一些空气中的水分。因此在精密分析工作中，称样前 应把已粉碎的样品在65℃（12h～24h）或90℃（2h）再次烘乾；一般常规分析时若样品吸 水很少，则可不必再烘。称样时样品一定要充分混匀。 二、生物样品的粉碎 生物样品细胞的破碎：当欲测组分（主要是各种多?激素、各种?以及各种基因工程的产物 如干扰素、胰岛素、生长激素等等）存在於生物体细胞内及多细胞生物组织中时，需在分 析测定它们之前将细胞和组织破碎，使这些欲测组分充分释放到溶液中去。不同的生物体 ，或同一生物体的不同组织，其细胞破碎的难易程度不一样，使用的方法也不完全相同。 如动物胰脏、肝脏、脑组织一般比较柔软，用普通的匀浆器研磨即可，肌肉及心脏组织较 韧，需预先铰碎再作成匀浆。植物肉组织可用一般研磨方法，含纤维较多组织则必须在捣 碎器内破碎或加砂研磨。许多微生物均具有坚韧的细胞壁，常用自溶、冷热交替、加砂研 磨、超声波和加压处理等方法。总之，破碎细胞的目的就是为了破坏细胞的外壳，使细胞 内含物有效地释放出来，获得有效的提取，细胞破碎的方法很多，按照是否外加作用力可 分为机械法和非机械法两大类。 除了上述一些方法外，目前人们仍在探寻新的多细胞破碎方法如激光破碎法、冷冻-喷射 法、高速相向流撞击法等。下面介绍几种在实验室中常用的破碎方法。 l．机械法 机械法主要是通过机械切力的作用使组织细胞破碎，有以下几种装置和方法可用於组织细 胞的破碎： ?高速组织捣碎机：由调速器、支架、马达、带杆刀叶、有机玻璃管（筒口加盖）等部分 组成，操作时将样品配成稀糊状液，放置於简内约占l／3体积，固定筒上盖子，将调速器 拨至最慢处，开动马达後逐步加速至所需速度，一般转速最高可达20000r／min。高速组 织捣碎机宜於动物内脏组织、植物肉质种子、柔嫩的叶和菜籽材料的破碎。 ?玻璃匀浆器：由一个内壁经过磨砂处理的玻璃管和一根一端为球状（表面经过磨砂）的 杆组成。操作时，先把铰碎的组织置於管内，再套入研杆，手工来回研磨，或把杆装在电 动搅拌器上，用手握住玻璃管上下移动，即可将细胞研碎。匀浆器的内杆球体与管壁之间 一般只有十分之几毫米，细胞破碎程度比高速组织捣碎机高，机械切力对生物大分子破坏 较少，制造匀浆器的材料除玻璃外也可是不锈钢、硬质塑料等。 ?普通研磨法：常用的有研钵和研磨。细菌及植物材料应用较多。加入提取液後进行研磨 ，加入少量的玻璃砂效果更好。 ?液氮研磨法：液氮的沸点为－194℃，在常温下迅速蒸发，可使样品迅速冷却，使组织变 硬，便於研磨。首先将研钵洗刷乾净，自然晾乾或烘乾，待研钵充分冷却後，先加约2/3 体积的液氮预冷，然後将0.5～1.0g样品（一般为生物样品）放入研钵中，加入适量液氮 研磨，研磨至白色粉末状为止。 2．物理法 物理法主要通过各种物理因素的作用使组织细胞破碎，常用的有以下一些方法： ?反覆冻融法：把待破碎样品冷至-15～-20℃使之冻固，然後缓慢熔化，如此反覆操作， 大部分动物细胞及细胞内的颗粒可被破碎。 ?冷热交替法：在细菌或病毒中提取蛋白质和核酸时可使用此法。操作时，将材料放入沸 水中在90℃左右维持数分钟，立即置於冰浴中，使之迅速冷却，绝大部分细胞被破坏。 ?超声波处理法：此法多用於微生物材料，处理效果与样品浓度及使用频率有关。用大肠 杆菌制备各种?时，常选用50～100mg／mL菌体，在IKG至10KG频率下处理10～15min。对於 其他细菌则视具体情况而定。应用超声波处理时应注意避免溶液中沉淀的存在，一些对超 声波敏感的核酸及?宜慎重使用。 ?加压破碎法：加气压或水压，在压力达到20～35MPa时，可使90％以上细胞被压碎。 3．化学及生物化学法 化学及生物化学法主要是通过化学试剂或?破坏细胞壁使细胞破碎，常用的有如下一些方 法： ?自溶法：将待破碎的新鲜生物样品存放在一定pH和适当的温度下，利用组织细胞中自身 的?系将细胞破坏，使细胞内含物释放出来的方法。自溶的温度，动物样品常选在0～4℃ ，微生物材料则多在室温下进行。自溶时，需加少量防腐剂如甲苯、氯仿等以防止外界细 菌的污染。 ?溶菌?处理：溶菌?可用蛋清或微生物发酵方法制得，具有专一地破坏细菌细胞壁的功能 。如用噬菌体感染的大肠杆菌细胞制备 DNA时，采用 pH 8.0，0.1mol／L Tris-0.01mol ／L EDTA制成每 lmL 2亿个细胞左右的细胞悬液，然後加入 100pg～lmg的溶菌?，37℃ pH 8.0保温 10min，细胞壁即被破坏。溶菌?作用专一性强，适用於多种微生物，人们较 喜欢使用。除溶菌?外，蜗牛?、纤维素?也常被选为破坏细菌及植物细胞之用。 ?表面活性剂处理法：较常用的有十二烷基磺酸钠、氯化十二烷基嘧啶、去氧胆酸钠等。 除上述方法外，通过改变细胞膜透性，破坏蛋白质与脂类的结合，也可达到破坏细胞有利 於蛋白质、?等物质的分离提取。这方面应用较多的有真空乾燥和用丙酮处理制成丙酮粉 的方法。在?的制备中，用丙酮乾燥，不仅是使细胞膜破碎的有效方法，而且可作成具有? 活力的干粉，长时间保存，作为一个很方便的原料样品在需要分析测定时以水或缓冲液把 ?提取出来。无论用哪一种方法破碎组织细胞时，都在一定的稀盐溶液或缓冲溶液中进行 ，一般还需加入某些保护剂，以防止生物大分子的变性及降解。 一、植物组织速测样品的制备 采集的新鲜植物样品，可在田间直接进行测定，也可带回实验室再进行测定。测定时如果 是直接压取植物组织汁液进行测定，样品可用湿布或毛刷擦净即可。如果测定时需要浸提 植物组织中的未同化的营养成分，则样品需要洗涤，其方法和植物组织全量养分分析样品 的洗涤方法一样。分析时将洗净的鲜样剪碎混匀後，立即用称量瓶或塑料容器称样，放在 瓷研钵中加适当溶剂或石英砂研磨，进行浸提测定。 鲜样如不能立即测定，则须放在冰箱中（－5℃）短期冷藏保存，以抑制其生理变化。测 定水溶糖用的新鲜样品也可用蒸汽处理後烘乾保存。 二、籽粒样品粉碎 为了防止油料作物种子在磨碎过程中损失油分，可从采取的样品中用四分法缩分出少量样 品，於70℃～80℃乾燥箱内乾燥15h～18h，取出，在瓷研钵中击碎，不能研磨。大豆和其 它含油少的种子则可以直接用磨磨碎。 三、瓜果样品的制备 「瓜果样品』』是泛指水果蔬菜中的果实、浆果、块茎、块根等。瓜果和蔬菜分析通常用 新鲜样品，采回的瓜果、蔬菜样品同样需要洗涤、擦乾。大的瓜果或样品数量多时，可均 匀地切取其中的一部分，但要使所取部分中各种组织的比例与全部样品中的相当。将分析 用的样品切成小块，用高速植物组织捣碎机（或研钵）打成匀浆，从混匀的匀浆中多点勺 取称样。多汁的瓜果也可在切碎後用纱布挤出大部汁液，残渣捣碎後再与汁液一起混匀、 称样。 四、动物样品的粉碎 1、组织和脏器 采集组织和脏器样品後，应放在组织捣碎机中捣碎、混匀，制成浆状鲜样备用。 2、水产品 对於鱼类，先按种类和大小分类，取其代表性的尾数，洗净後沥去水分，去除鱼鳞、鳍、 内脏、皮、骨等，分别取每条鱼的厚肉制成混合样，切碎、混匀，或用组织捣碎机捣碎成 糊状，立即分析或贮存於样品瓶中，置手冰箱内备用。对於虾类，将原样品用水洗净，剥 去虾头，甲壳、肠腺，分别取虾肉捣碎制成混合样；对於毛虾，先捡出原样中的杂草、砂 石、小鱼等异物，晾至表面水分刚尽，取整虾捣碎制成混合样。贝类或甲壳类，先用水冲 洗去除泥沙，沥干，再剥去外壳，取可食部分制成混合样，并捣碎、混匀，制成浆状鲜样 备用。对於海藻类如海带，选取数条洗净，沿中央筋剪开，各取其半，剪碎混匀制成混合 样，按四分法缩分至100g～200g备用。 五、食品的粉碎 ?、研钵粉碎 研钵，有瓷、铜、玛瑙等质地。适於量少、低水、低脂样品的粉碎。 ?、药碾粉碎 铁质，易锈。适於样量大，且有一定硬度和韧性样品的粉碎。 ?、机械粉碎 ?切削式粉碎机：旋转刀与固定刀形成切削。特点是粉碎时产热少，低沸点成分损失少。 ?磨球式粉碎机：圆筒内有磨球（瓷或不锈钢），圆筒定速转动，磨球冲击样品使之粉碎 。 ?磨粉机：两片钢磨间狭缝，转动碾碎样品，或两辊筒间狭缝，转动使样品粉碎。 ?高速微量粉碎机：1000W，1400 r/min.，样品高速旋转，激烈碰撞（样品间、棱刀间、 内壁）。优点是细度小；缺点是产热多，一次粉碎量很少。 ?组织捣碎机：软、高水、高脂样品适用，如鱼、肉、果、蔬的切碎。 ?绞肉机 ?注意事项 ?依据样品性质和检验项目正确选择粉碎方法。 如纤维素多的样品，不宜用研钵、药碾，而宜用切削式粉碎机；测金属元素样品，不宜用 金属器具而宜用瓷钵。固态高脂、高水样品用切片或剪碎的方法处理。 ?样品细度应合乎检验要求。过粗，被测组分难以分离，且难以均匀；过细，常会造成被 测组分中的低沸点成分的损失。 粉碎样品的过筛 1、目的 提供均匀粒度的样品；除杂。 2、筛子的种类 ?圆孔筛：即谷物选筛。以mm为单位作为筛孔孔径，并以此作筛号。有一定的使用要求。 ?长孔筛：谷物选筛的组成部分。用来筛除长条状的机械杂质。 ?铜丝筛：铜丝编织而成。筛号以「目」表示。「目」的意义通常是指1英寸长度（2.54cm ）中的筛孔个数。 ?筛绢：蚕丝或尼龙为材料，国内用CB、CQ表示，如CB36、CB42、CQ20，後面的数字为1厘 米长度内的筛孔个数。国际上常用GG、XX表示（GG指特料筛绢，为粗线织成，筛孔较大； XX指双料筛绢）。 3、筛子孔径的计算 表4-1 主要分析指标样品粉碎粒度的要求 指 标 分析筛规格/目 筛孔直径/mm 水、粗蛋白、粗脂肪、粗灰分、钙、磷、盐 40 0.45 粗纤维、体外胃蛋白?消化率 18 1.00 氨基酸、微量元素、维生素、尿?活性、蛋白质溶解度 60 0.25 在农产品工作所用的筛子有两种：一种以筛孔直径的大小表示，如孔径为2mm、0.5mm等； 另一种以每英寸长度上的孔数表示。如每英寸长度上有100孔、为100目筛子（或称100号 筛子）。孔数越多，孔径越小。筛目与孔径之间的关系可用下列简式表示： 　 　 1英寸 = 25.4mm； 16mm = 25.4 – 9.4；9.4为网线宽度。 4、注意事项 ?宜在密闭状态下按规定方法过筛。 ?未过筛的筛上物不宜任意丢弃。 ?过筛後的样品应混合均匀。 思考题 ?样品粉碎技术主要有哪些，都涉及到哪些工具？ ?动物样品的粉碎技术中，你认为哪一种效果更好？ -- 孤独是卓越心灵的命运 --

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