作者kalen123 (嘴炮男)
看板Chemistry
标题Re: [实验] RP-HPLC平衡时间
时间Fri May 24 20:06:59 2013
※ 引述《Nox4156 (@@!)》之铭言：
: 请教一下板友
: 最近跑RP-HPLC时发现平衡时间不太够 想要确认一下多长的管柱需搭配多久的再平衡时间
: 因为我的层析方法是拉梯度的 怕下一个样本进样时管柱还没平衡好
: 我的管柱体积是0.8 mL 再平衡时间是以10倍管柱体积计算 至少要整个管线皆流洗到
: 我朋友有跟我提到说WATERS以前教育训练时有提到一个公式 可以估算需流洗的体积
: 各位板友有知道这个公式吗?!
: 另外，如果不同的管柱类型 (SEC、reverse-phase、normal-phase)再平衡的时间估算
: 会差不多吗?! 感谢各位了
这三种管柱各有特性，
但是共同点是你的东西一定要全部出来了才能开始平衡，
否则会造成背景值的昇高甚至无法解释的波峰。
此外平衡时的流速可以比工作时的流速快，
只要还在原厂的说明书允许范围内，
这点可以节省时间，
但是要记得调回来就是。
normal phase:
一般状况下用起始条件的溶液冲十倍体积是可接受的。
唯一的例外是当溶液里有MeOH时，
管柱上还残留一点点的MeOH，
有时就能造成你的产物分离时间明显减短。
所以当有用到MeOH时，
不建议一开始就用起始条件，
而是用更非极性的条件先把管柱"归零"，
然後再用起始条件。
就以0.8 mL的分析级管柱为例，
假如流洗比例是MeOH/DICHLOROMETHANE 5/95 -> 30/70，
我的平衡方法是先用纯DICHLOROMETHANE冲五倍体积，
再用MeOH/DICHLOROMETHANE 5/95 冲十倍体积。
reverse phase:
reverse phase很少遇到平衡上的问题，
只要没有乱来往里面打入不该打的有机溶液或是让空气跑进去的话。
SEC:
SEC很麻烦，
它的流速不能快，
溶液对材质口径大小影响很大;
所以平衡时间是以"夜"算，
而且必须是梯度式，慢慢的改变。
抓SEC条件是场恶梦，
特别是当有人在等你的报告时……
它不是那种"我今晚加班"就可以快速解决的玩意，
必须小心，而且早点动手。
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