作者crystalwu (婧啵)
看板Biotech
标题THP-1诱导发炎体
时间Tue Oct 3 21:26:53 2023
请问板上各位大大有没有人做过THP-1巨噬细胞发炎诱导？
目前已经有将他分化成巨噬细胞贴盘了 细胞镜检状态没有太大问题
但以LPS/ATP诱导难以有大量发炎因子产生（目前都只有先测IL-1beta)
现使用 1 ug/mL诱导6小时後添加5 mM ATP培养1小时，是查到相关资料中普遍使用条件
恳求有相关经验的神人指点一二
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1F：→ NINJA999: 你的检测方法是什麽？你想看的发炎因子是什麽？你目前 10/05 09:55
2F：→ NINJA999: 的诱导方式是让细胞进行pyroptosis ，也许细胞死光了也 10/05 09:55
3F：→ NINJA999: 不一定。单纯的给LPS应该就可以诱导发炎了 10/05 09:55
4F：→ crystalwu: 目前是以ELISA kit测IL-1beta跟TNF-alpha,确实没有想过 10/05 13:17
5F：→ crystalwu: 焦亡这方面 我下次试试下LPS就好 10/05 13:17
6F：→ crystalwu: 另外想请教诱导成功是否会在形态上有明显变化？变成梭 10/05 13:18
7F：→ crystalwu: 形？ 10/05 13:18
8F：推 NINJA999: 我自己是用LPS/IFNg诱导细胞变成M1型态，细胞会变的更 10/05 14:14
9F：→ NINJA999: 平更大，反而不会是梭状。 10/05 14:14
10F：→ crystalwu: 了解～请问您的经验是加了IFN-gamma才成功吗？ 10/05 14:49
11F：→ NINJA999: 我主要是做macrophage的极化，所以给LPS+IFNg, 诱导成M1 10/05 19:31
12F：→ NINJA999: macrophage, 在我的实验中，NLRP3, IL1b的蛋白质表现 10/05 19:31
13F：→ NINJA999: 都蛮明显的，另外TNFa, IL6的RNA也都有明显表现。 10/05 19:31
14F：→ crystalwu: 了解感谢！另外我今天看我分化两天後的细胞 发现有很多 10/06 14:24
15F：→ crystalwu: 空泡产生 可能真的在诱导前就让细胞死亡了？不知道您会 10/06 14:24
17F：→ crystalwu: g 10/06 14:24
18F：→ NINJA999: 你的分化条件是什麽呢？我分化之後，没有像你那样的空泡 10/24 12:59
20F：推 b0109135: 我inflammasome也是用LPS/ATP刺激, 依你用il1b ELISA测m 11/07 14:50
21F：→ b0109135: edium中含量看似没有问题，ATP可以检查看看有没有坏，AT 11/07 14:50
22F：→ b0109135: P也可以换成nigericin。给你参考 11/07 14:50
23F：推 surgeon999: 小弟弱弱借问thp1，前3hr LPS（10ng/ml)刺激後1hr Nig 11/13 02:09
24F：→ surgeon999: ericin (20uM)结果WB看inflammasome 相关分子表现都下 11/13 02:09
25F：→ surgeon999: 去，求解～ 11/13 02:09
26F：推 b0109135: 回覆999: 看NLRP3 活化最直接就是去看IL1b 有没有releas 11/13 16:40
27F：→ b0109135: e(p20),可以做ELISA或是 medium 的TCA沉淀，最近pyrptos 11/13 16:40
28F：→ b0109135: is 蛮夯的看GSDMD切割也行，都是CASP1的下游。 做inflam 11/13 16:40
29F：→ b0109135: asome 活化第一次建议做- -，+-，++（LPS &Nig)的contro 11/13 16:40
30F：→ b0109135: l 检查。 如果你加LPS 後NLRP3没有起来 建议加大浓度或 11/13 16:40
31F：→ b0109135: 放久一点。跟你指导老师或老板多讨论才是最重要的。 11/13 16:40
32F：推 surgeon999: 谢楼上大大，事实上我有试过纯加LPS是都有起来的（ex: 11/15 14:59
33F：→ surgeon999: IL-1b, NLRP3)但神奇的地方在於加了Nigericin後，讯号 11/15 14:59
34F：→ surgeon999: 是变弱的～ 照理说它是inflammasome 的activator才对 11/15 14:59
35F：→ surgeon999: ，甚至GSDMD没啥变化Q，那个TCA沈殿似乎蛮有意思从没 11/15 14:59
36F：→ surgeon999: 想过～想多了解>< BTW ELISA的结果都跟WB一致（IL-1b) 11/15 14:59