作者Fourfish (～四条鱼～)
看板Biotech
标题Re: [求救] BCA与Bio-Rad protein assay kit....
时间Fri Aug 13 12:40:58 2010
※ 引述《azywu ()》之铭言：
: 各位版友你们好，小弟是个非生科相关科系的研究生，
: 自认为没有深厚的分子生物背景，所以请大家多多包含。
: 小弟最近遇到了一个实验上的问题，自己感觉到相当的奇怪，
: 实验目标是针对某株细菌在培养的过程中监测上清液中的蛋白物质，
: 小弟使用了BCA protein assay kit在不同的培养时间采样分析，
: 上清液都经过了0.22过滤头过滤掉悬浮的细菌才分析，
: 控制组的培养基也有进行同步的蛋白物质监测，
: 实验的结果显示培养时间越长上清液中会累积蛋白物质，
: 而且以BCA protein assay所分析到的浓度相当的高，
: 不过小弟困惑的是，小弟以相同的样品，改以Bio-Rad protein assay kit分析，
: 其结果竟然是上清液中完全没有任何的蛋白质物质，
: 在595 nm的吸光值跟标准品的0点差不多。
: 虽然BCA的侦测灵敏度(0-100 ug-BSA/ml-OK)
: 相对的较Bio-Rad(200-900 ug/ml-OK)的方法来的高，
: 不过从实验结果来看，BCA分析到的结果上清液的蛋白物质浓度应该很高，
不知道你用BCA测的很高是有多高？
你应该有换算出sample的浓度吧？
: 所以应该不至於低於Bio-Rad方法的侦测极限，
就你所说得灵敏度来看
BCA: 0-100 ug/ml
Bio-Rad: 200-900 ug/ml
中间100-200很明显有个落差在
如果sample有110 ug/ml或190 ug/ml
对BCA来说都是爆表 但对Bio-Rad来说都是不足量
所以你怎麽会觉得sample的浓度不会低於Bio-Rad的最低极限200 ug/ml？
: 这个问题真的让小弟很苦恼，不知道该相信哪一个分析方法的结果....
: 不知道各位版友有没有遇过相似的问题，或是可否给小弟一点建议或是解释?
: 先感谢各位版友的协助!!
还有 实验做法可以再说明清楚一点
因为就算是同一套测浓度的试剂
里面也有不同的做法 大量跟微量的做法是有差异的
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.116.94.157
1F：→ enjorus:我倒觉得, 要养成习惯去看说明书 很多问题解决了 08/13 18:00
2F：→ turtle24:sample做稀释就不会一边爆表一边低於极限了 08/13 18:20
3F：→ inchew:同意1F,任何assay先仔细看说明书会少走很多歪路... 08/13 19:08