作者soom ()
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标题Re: [求救] Cre-LoxP系统
时间Wed Jun 23 03:12:40 2010
※ 引述《tunafung (无)》之铭言:
: 我知道Cre-loxP的系统是怎麽作用
: 我想请问的是一般用这个系统的时候
: 是用什麽策略来交配小鼠
: 比如说我现在有个 vil-Cre/+ 的老鼠
: 跟ALDH2 Lp/Lp的老鼠配种後 接下来是要跟哪种基因型的小鼠在配
: 然後繁殖 感谢各位大大
通常我在看这个系统的时候 会注意的是
1.Cre是在什麽条件下会被表现?
2.loxP 包住的是什麽区域?
像你提到的vil-Cre似乎是会在大小肠、肾脏还有proxima tubule这些地方表现cre
於是在发育的过程中,只要有表现过villin的细胞,它的ALDH2都不会表现
所以会造成这只老鼠的大小肠、肾脏还有proxima tubule等部分都不会有ALDH2
接下来就是要看你怎麽设计了,比如说你想要把所有Cre作用过的细胞都做标记,
那你可以把带loxP-stop codon-loxP-eGFP 这样repoter的老鼠在配依次
你就可以拿到cre作用後会有GFP信号的老鼠,可以很简单的透过flow去分析/分离
(当然上面只是我在嘴炮,实际上还是要看看你的实验需要)
而对於Cre的操纵也还有很多种更细微的调控法,
比如常常看到Cre-ER这种在Cre上面接了estrogen receptor的fusion protein,
於是就会造成需要给老鼠estrogen的时候才会开始有Cre的表现与作用
还有loxP包起来的区域也会有不同的效果,比如包了某个基因的exon,那这个基因
可能就会被KO。又或者如果是包了某个CDS前方的stop codon,那这样子Cre作用後
反而会打开这个CDS的表现。
所以在看这个系统的时候真的是处处玄机有够刺激啊..
这只是我个人的观点啦,有错还请版上各位指正..
(尤其是柏油大神,他们家可是这方面的专家)
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