作者silverberry (圈套和回圈的语言....)
看板Biotech
标题Re: [问题] coomassie blue煮沸染色法
时间Mon Nov 2 17:55:59 2009
※ 引述《transmore (小次郎)》之铭言:
: ※ 引述《phyton (飞腾)》之铭言:
: : 我的作法是
: : 使用一般的 coomassie blue 染色液及去染液
: : 1/把 gel 丢到染液里面
: : 2/微波炉煮
: : 3/去除染液 加醋酸洗一遍後泡醋酸
: : 4/微波炉煮
: : 5/丢一张半张擦手纸,放着摇
: : 6/摇到冷掉後微波炉加热,擦手纸太蓝了就换一张
: : 7/视情况更换或不更换醋酸洗液
: : 8/通常一个小时可以看到bands 半天可以退染得很漂亮
: 我的作法是..
: 染胶按照一般流程和配方
: 退染的时候直接把染好的胶放到水中(自来水就好)
: 然後拿去微波3-5分钟
: 加热到拿出来手会觉得微烫就好
: 不要烫到没办法用手直接拿盒子
: 接着把水倒掉换水再做一次
: 通常做个三次就够了
: 大概20-30分钟就可以退染完成
: 水量、加热时间、微波炉的强度都可以调整
: 染剂可重复使用
: 效果不好的时候再换新的
我们实验室的作法是老师在国外的作法
染胶的时候染剂加到盖过胶片
微波炉微到手摸起来微温 (不要觉得烫 这样会有很酸的味道)
摇 15 min 看看可不可以看的到 band,如果不行就再做一次
退染的话把染剂倒掉 (都会回收)
先用自来水冲一下 把残余的染剂去掉
加退染剂盖过去
也是微波到微温 加一张擦手纸去摇
15 min 後就退的差不多了 如果要有漂亮的 background 就再做一次~
过去的经验都还不错
封片或扫片前泡自来水把味道洗掉 再用 50% MeOH 泡到缩到喜欢的大小
只要微波的时候有加盖子 不要微得太热
微波炉和 hood 闻起来都还好~
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人生就像被强暴 *
* 要嘛睁开眼睛反抗 *
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要嘛闭上眼睛享受 * *
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◆ From: 140.112.79.64
1F:推 J0HAN:所以重点是加热染剂和退染剂罗 可以预热再把胶放入吗? 11/03 11:24
2F:→ J0HAN:有时候 Hot 的胶不想退太久 但不能连胶一起拿来微波 XD 11/03 11:25
3F:→ silverberry:对啊~ 主要就是热可以加速反应~ 以前我还有想过把 11/03 11:59
4F:→ silverberry:整个染胶的缸丢进震荡水浴锅 XDD 11/03 11:59