作者kuroo (东京宿便★娯楽)
看板Biotech
标题[求救] Sample preperation for MALDI-TOF
时间Thu Jul 16 14:39:29 2009
最近有个实验是要找出 Chemical labeling 片段
目前想用 MS 来做
我们实验室并没有经验
最近几次跑 MALDI-TOF 结果都没有讯号 Orz...
(结果都是小分子,应该是盐类)
样品是 Purified Membrane Protein
附近实验室都是走2-D胶 → In-gel Digestion流程
所以不知道我们的步骤那边有问题
希望可以在这里求到解答
以下是实验流程:
纯化的 Protein (10-20 ug in 200λ),加入 Chemical (对照组则不加)
↓
反应完用浓缩管除去盐类、未反应的 Chemical,并以纯水清洗三次
↓
浓缩後的体积约 50 λ,加入 Trypsin (1:20),37℃ 16 hr
Trypsin 购自 Promega (Sequencing Grade)
↓
Trypsin 作用完,抽真空去除水,交给技术员跑MALDI-TOF
以上...
先谢大家了 >"<
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