※ 引述《lazyQ (认真过每一天)》之铭言： : 一般在做ligation时都是vector + insert 去进行反应 : 如果说现在我有2个insert，把vector + insert 1 +insert 2，加在一起 : ligase有办法成功的将这三者接成一个环状的plasmid吗？ : (只是想知道这样能否成功，不讨论先接一个insert，再接另一个喔) : (不考虑in frame,cutting site...etc这些问题的话) : --------------- : 不是我想偷懒啦XD : 最近做了一个clone，里面有insert 1和insert 2 : 下一步是搬到另外一个vector(两端的cutting site是一样的BstXI) : 好死不死，insert 1和insert 2中间发生mutation，跑出一个BstXI : 这下冏了，我无法用BstXI将 insert1 - insert2 整个搬出来。 : 原本的规画 : vector1: -------BstXI---insert1-----------insert2---BstXI---- : mutation後的结果 : vector1: -------BstXI---insert1---BstXI---insert2---BstXI---- : 这样能理解吗？ 我讲得好乱>__<~ 其实 BstXI 认的cutting site是 C C A N N N N N / N T G G G G T N / N N N N N A C C 也就是说 当中间的N是不同时 是没有办法接起来的 所以 可以check一下两边的seq 如果不一样 就放心做下去吧 --

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