作者NoahArk (小空)
看板Biology
标题[问题] 想请教抽小鼠组织RNA260/280吸光值很低?
时间Thu Jun 30 13:50:32 2022
想请教各位大大，最近在使用Trizol抽小鼠RNA，
吸光值260/280都在1.3-1.6左右，大部分都在1.3到1.4左右，
我抽RNA层的总量抽差不多一半，吸光值260/280还是很低，老师说至少要1.8以上
下面是我的操作流程，是不是我抽RNA的过程有错误QAQ
1. 动物组织秤50mg，先剪成1Ⅹ1 mm2大小面积 在灭过菌的研钵倒液态氮磨碎
2. 加入1 ml Trizol pipetting(tip反覆抽吸)混合均匀，移至1.5 ml 灭菌过的离心
管。
3. 样品在室温静置5分钟。
4. 加入200μl氯仿(chloroform)，震荡混匀15秒，室温静置15分钟。
5. 以12,000 x g於4 °C离心15分钟。
6. 离心後会分层，小心取上清液至新的灭菌过离心管，RNA在此层。
7. 加入500μl的2-丙醇(isopropanol)，pipetting混合均匀。
8. 室温静置10分钟，以12,000 x g於4 °C离心10分钟。
9. 使用tip吸取上清液
10. 加入1 ml 75% 酒精(Ethanol)，震荡混匀样品。
11. 以7,500 x g於4 °C离心5分钟。
12. 使用tip小心吸取酒精後，在laminar flow操作台风乾
13. 加入30μl ddH2O 回溶，pipetting 10-15分
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc), 来自: 125.227.200.221 (台湾)
※ 文章网址: https://webptt.com/cn.aspx?n=bbs/Biology/M.1656568234.A.7E2.html
※ 编辑: NoahArk (125.227.200.221 台湾), 06/30/2022 13:52:40
1F：推 camphor0614: ddH2O? 应该用DEPC水回溶吧 07/09 14:06
2F：推 leptoneta: 酒精可以多洗几次 环境够乾净用灭菌水回溶也无妨 07/10 10:56
3F：推 pent: 水层不要太贪，尽量不要吸到白白的，试看看 08/10 16:52