【问题】：从细胞中取RNA到转成cDNA到最後跑qPCR可能出问题的步骤和确认方法 【问题起因】：1.qPCR出来的结果不太正常,要如何学习去找出问题的根源 首先 取RNA时 要先确保RNA不会被降解 过程中的小细节不提 取完之後到跑qPCR之间 有哪些方法可以知道自己取出来的RNA有没有 问题呢? 2.用kit(invitrogen)取出的RNA 280/260的值很好(~2.0) 可是260/230却很糟 (~0.5)过程我也没用有机溶剂 用kit的可以用酒精洗吗? 【个人看法】：取完之後先用nanodrop看 280/260 和 260/230的 O.D.值 但是就算O.D.值没有问题 RNA有可能断成小片段而不知道 导致最後qPCR的结果不好 (melting curve没问题) 因此中间可能要用跑胶的方法去确认RNA的完整性 但是我大学科系 非生科背景 原理懵懵懂懂 不知道跑胶该设那些组别来跑 跑cDNA和跑RNA各有那些优缺点也不知道 学长姊也都非生物背景 大致上都不知道 (是生物背景的也没做PCR) 可以请各位给些建议看的书籍和一些建议吗? 谢谢!!! 【参考资料/连结】： --

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