作者linzijay (乌龟涵)
看板Biology
标题[问题] RT-PCR primer 不能用
时间Thu May 9 17:06:04 2013
【问题】
我设计了一对primer想用来侦测mRNA的量
片段位於Exon上，大小约75bps，
收到primer後有用genomic DNA做为template去跑PCR，
跑胶结果是Single band，且大小符合，
於是就用RT PCR後的cDNA做为template去跑PCR，
跑胶结果却是2条band且都大於100bps，
有跑RNA胶也有跑-RT(有MMLV不加RNA)确认无DNA污染
不知道为什麽会这样？
(PCR药品条件都一样，elongation时间为10秒)
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.116.61.141
1F：推 qiet:你用的sample确定positive? primer设计有跨exon吗? 05/09 22:27
2F：→ qiet:可上网用primer blast去确认你使用的primer是否有可能会P到 05/09 22:28
3F：→ qiet:其他不是你的target gene的cDNA 05/09 22:29
4F：推 NARCOS:恭喜你拉!!!! 就是这个sample 不表现这个基因阿~! 05/22 07:00