【问题】： 使用ELISA来检测半抗原和抗体之亲和常数以进行之後竞争法的实验 【问题起因】： 实验使用"化学方法修改过後的hapten和BSA结合"(称之Hapten-BSA)先和抗体结合 再因原本的Hapten和抗体的亲和常数较佳所以会将hapten-BSA赶走，以看到讯号改变 实验仪器是以本身实验室开发的系统且有做出结果 但为了更加确认，希望可以以成熟的ELISA实验方法 求出Hapten和抗体之affinity constant。 Ps.这边使用的hapten-BSA和制造抗体的抗原是不一样的， 为了让它和抗体的亲和常数较差，还故意小小的修改Hapten的结构 【个人看法】： 因为小分子(我实验的药物分子量只有170)为半抗原，在ELISA的实验上 ，间接法和三明治法都不合适，侦测方法大多为间接竞争法。 即Hapten-BSA先coating在盘子上，再加入固定浓度之抗体和不同浓度之Hapten， 而後加入二抗和基质後，便可得到OD值会随Hapten浓度增加而下降 (因Hapten会先和抗体结合，剩下的抗体才会接盘子上的Hapten-BSA)。 我自己有阅读其他有关ELISA的文献，但我看到的都仅有Hapten-BSA和抗体亲和常数算法 这方面我已经有足够的文献可以解答Hapten-BSA和抗体的Affinity constant。 但在Hapten和抗体求出affinty constant上却苦无办法。 Ps.我本身为化学系，这个问题也问过身边可以问的生科系同学了， 但好像他们之中没有人需要算这个，所以无法给我建议， 而我也去找了许多免疫学相关的书籍，但书都只给我亲和常数的推论 并没有给在间接竞争法上求小分子和抗体的亲和常数公式 请可以帮忙解答的大大给我意见或参考文献，我感激不尽。 【参考资料/连结】： 我有找到许多SPR同样使用间接竞争法， 它可以同时求出Hapten-BSA和Hapten跟抗体的亲和常数。 但是ELISA相关文献仅有Hapten-BSA和抗体的亲和常数计算让我有点匪夷所思。 SPR文献为:electrochimica Acta 1999 44 3849-3854 Elisa文献为:Talanta 2005 66 1005-1011 --

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