※ 引述《kuogary1 (桂冠)》之铭言： : 标题: [问题] 请问基因图谱如何定序 : 时间: Fri Jun 25 22:17:06 2010 : : : 【问题】：基因图谱如何定序 : : : 【问题起因】：书上写说，先把DNA解开，然後加入dATP, dGTP, dCTP, dTTP与引子 : : 接着再把它们混合後分到四个试管，四个试管分别加入ddATP, ddGTP, ddCTP, ddTTP : : 然後开始反应 : : 反应完成後跑电泳读谱 : : 【个人看法】：可是DNA不是由互补的两股组成吗？ : 这样直接把DNA解开去跑电泳，得到的结果怎麽有办法代表DNA序列？ : 应该是要先把两股分离开来吧？再挑一股来跑吧 : === : 先感恩各位大大的回答了^^ : -- : 饥饿是最好的调味 孤独是最强的催眠 疯狂找一双唇 能够当我酒杯 : : 早就对这一切厌倦 也曾愤怒喝下圣水 却又无助醒在 下个漫长黑夜 : : -- :

※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc) : ◆ From: 112.104.158.145 : → turtle24:"引子"设计成只认其中一股 06/25 22:26 : 喔喔喔~了解 : 那所以，如果像是一般细胞中DNA的复制 : 那个DNA复制就是有两组RNA引子从两头进行吗？ : 以及，如果这样，那PCR中的引子，是不是都需要特别挑过... : 不是所有想放大的DNA都能使用？ : ※ 编辑: kuogary1 来自: 112.104.158.145 (06/25 22:32) in vivo的DNA replication从由特殊序列所构成的origin开始 通常在原核内origin只有一个 然後是bidirectional (因为是环状DNA) 真核的话就相当多个 不然复制完都中秋节了 然後"基因图谱"的定序方式通常是会先将DNA打碎之後ligate到固定序列的aptemer 或是linker上 在看要clone进vector里面再进行sanger法定序或是直接上第二代定序机 aptamer跟linker的序列就是universal的primer序列 这些在一般遗传学跟分生课本里讲的都很清楚可以自己参考看看 还有没错 几乎每间实验室都花不少钱在化学合成的primer上面 -- 人好 欠表 --

※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc) ◆ From: 118.165.225.252 ※ 编辑: Ianthegood 来自: 118.165.225.252 (06/25 23:40)