作者zphiroude (凯凯)
看板Biology
标题[问题] 困惑的考古题
时间Tue Mar 9 22:51:00 2010
【问题】：
Cloning DNA 片段约2KB至pUC18 中，养在抗生素的plate中。
利用X-gal 筛选，得到蓝白各一个菌落。
但是 在蓝色菌落中的切割位只有发现约45 bp的片段 ， 而白色菌落中更是完全没有外来
的片段！请解释原因!!!
附上原题目：
http://ppt.cc/uk-c 第四题
【问题起因】：
中兴大学98年生技所考古题....小弟是考生
【个人看法】：
小弟知道蓝色＝beta-galactosidase水解X-gal ， DNA片段未插入。
白色＝DNA片段插入 ， 破坏了 Lac Z 。
但是题目....真的没概念。请大大们帮忙解答。 感激不尽！！
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 61.62.183.98
1F：推 MoonMan0319:有可能是RE使用不当吧? 03/10 01:14
2F：→ zphiroude:限制脢使用不当吗？可以帮忙解释一下吗？拜托了 03/10 09:06
3F：推 tsubasawolfy:题目完整叙述是啥..? 03/10 12:14
※ 编辑: zphiroude 来自: 61.62.183.98 (03/10 12:51)
4F：→ beowulfo:建议应该回答可能的原因.然後可以用甚麽方法来确认.. 03/10 16:33
5F：→ zphiroude:小弟就是不知道可能的原因，拜求大大帮忙 Orz 03/10 17:56
6F：→ turtle24:primer互黏变成45bp,codon无影响? vector互黏变白colony? 03/10 18:43
7F：→ turtle24:假设是用两个切位送进去的话 pUC18不大 insert有2kb 03/10 18:45
8F：→ tsubasawolfy:两个ori的plasmid不会replication 03/10 22:11
9F：→ tsubasawolfy:蓝色大概就真的接进primer dimer 不过有切胶也不会这 03/10 22:12
10F：→ tsubasawolfy:蠢吧...白色没target insert大概是塞入别段DNA 03/10 22:13
11F：→ tsubasawolfy:不对 题目是一丁点都没有... 03/10 22:13
12F：→ zphiroude:primer ? transformation 没用到primer吧＠＠ 03/11 09:01
13F：推 senlin:1)RE有star activity 无insert 但多切破坏LacZ 2)此载体 03/11 09:23
14F：→ senlin:未被多切 且插入的45bp片段未影响LacZ的ORF 所以仍呈蓝色 03/11 09:25
15F：→ senlin:1)是指白色的菌落 2)是指蓝色的菌落 03/11 09:25
16F：→ zphiroude:感谢楼上大大指点，但插入的45bp未影响lac Z的ORF， 03/11 10:12
17F：→ zphiroude:但pUC18 的切位应该是设计在ORF中，怎会无影响？？ 03/11 10:13
18F：→ senlin:接得好就变成虽外加15个胺基酸(=45bp) 但未影响酵素活性区 03/11 10:59
19F：→ senlin:（因未改变LacZ大部分的ORF序列） 03/11 11:02
20F：→ zphiroude:了解了，这样就合理了。感谢senlin大大指导 03/11 11:21