现在我想要做一个3kb左右的PCR 由於之後要接着做cloning，所以比较要求准确性 先前试过的几个PCR酵素搭配模式： pfu DNA polymerase (Promega) only (0.6U in 25ul)（使用期限仅到今年五月） Blend Taq DNA polymerase (Toyobo) only (0.5U in 25ul) Viogene Taq DNA polymerase (5U in 25ul) + pfu (同前) (0.6U in 25ul) （用这种搭配模式的原因是因为有看过paper利用pfu专责做更正） 使用的template：cDNA （以random primers做RT） condition：95℃ 5min 95℃ 1min 69℃ 1min (35 cycles) 72℃ 7min 72℃ 15min （另外，第一组用pfu的在denature及anneal都拉长到3min，後来听同事意见改短） 结果只有第一组pfu only有跑出一条700bp左右的band，其他两组完全跑不出来 这样子的话，我要从哪一方面着手改，才能够跑得出来呢？ 我一个同学有跟我说过，他们那边用Merck的pfu DNA polymerase，可以很轻松的跑到12kb 难道真的要换Taq来做才做的出来吗？ 谢谢 -- ◎ Origin: 中央松涛站□bbs.csie.ncu.edu.tw From: 144.192.192.210.dynamic.ttn.n