※ 引述《wulito (考完闷的紧)》之铭言： : 最近在尝试这个方法 发现几个问题想请问大家.. : 1.使用phenol - chloroform 萃取时 中间有层乳白色层 应该是蛋白质吧 : 应该要去掉 但发现不太好分离 往往都会被一起吸上来 : 而且白色层非常的厚 : 是因为proteinase K 反应不完全吗 proteinase K是作用在与DNA/RNA binding的protein上 白色层本来就是这样你要吸慢一点... 拇指别放太快... : 2.最後在跑电泳与 260 / 280 确认的时候 : 发现有两条以上的亮带 不晓得这样算不算正常呢 : 此外在测 260 / 280 时 居然没有吸光值 : 没有吸光 又怎麽会有亮带呢 好奇怪 两条亮带是18S/26S的rRNA 不是你要的东西吧 测亮带的目的通常是要make sure DNA/RNA isolation的Quality 至於有无吸光...能再解释清楚一点吗 是260=0 280=0还是280>260? : 我的实验步骤如下: : 1. overnight 菌液1.5ml 到入eppendorf中,离心3000 xg, 10 min : 2. 用1 ml STE buffer washㄧ次 : 3. resuspend 在200 μl STE 中, 加入10 μl 20% SDS (final..1%) 混匀, : 不可vortex : 4. 放入65℃(water bath)/10 min, until cell lyse : 5. 加入10μl proteinaes K, final:200 ng/ml, 37C, 3-4 hrs : 6. 加入400 μl STE ,dilute,再加等体积的phenol/chloroform 萃取, 缓慢混合 : 7. 离心1000 xg/5 min, 以剪头tip吸取上清液 : 8. 萃取至中间白色层消失, 约三次萃取 : 9. 加1/10体积 NaOAc(3M) , 混匀, 再加2V 95% EtOH 混匀 : 10. 用tip卷起DNA, 稍微晾乾,溶在50-100μl TE/DI 中 -- 注音文，实际上叫做分散式阻断中文攻击（Distributed Denial of Chinese） 　 定义：攻击者利用某种发音符号参杂在文句之中，使其阅读困难， 称为阻断中文攻击（Denial of Chinese），简称 DoC。 而使整篇文章充满非中文的发音符号，则称为分散式阻断中文攻击， 简称 DDoC。 范例：http://home.anet.net.tw/aa013797/ --

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