作者jaycao (风一吹特别冷)
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标题Re: [问题] 关於DNA沉淀
时间Wed Apr 26 00:26:22 2006
※ 引述《lovepig414 (pig)》之铭言:
: ※ 引述《fjubiology (Proposal结束)》之铭言:
: : 在适当浓度的阳离子(Na+, NH4)存在下,ethanol或isopropanol均可使核酸结构生改
: : 变,分子聚集成团状而从溶液中沉淀出来。Isopropanol相对於ethanol,其挥发性低
: : ,在核酸沉淀後较不易自行挥发去除。且在以isopropanol沉淀DNA时,盐类倾向与核酸
: : 一起沉淀,因此一般在isopropoanol沉淀後,应以70% ethaol清洗DNA以便将盐类去除。
: : 沉淀DNA所需之ethanol体积:无水酒精(100%)为DNA体积2~2.5倍
: : isopropanol体积为DNA溶液体积之0.6倍
: : 楼上的应该是问这个,而不是70%酒精洗盐的步骤。
: 恩 谢谢大大的回答 我是要问这个的
: 可是我还是不知道真正的原因耶
: 为什麽要用99.9%的酒精来将DNA溶解作沉淀
: 而70%酒精可用来清洗 是极性所导致的吗?
: 阿可以解说一下
: 为什麽在适当浓度的阳离子下 (我想一般都是用醋酸钠吧)分子会聚集成团呢?
: 是因为其为盐类而解离出的正负电离子进而促使带负电的DNA聚集吗?那pH值有什묊: 麽影响呢?ꄹ因为醋酸钠的pH值好像要配在5.5吧!那为什麽需要酒精呢?用盐类不就可ꔊ: 以沉淀了吗?
: 不好意思唷 我好像问太多了 不过我真的很想懂 这种资料应该很难找到吧
: 所以才问问大家的 希望 能移除疑惑再继续做实验罗 拜托有人解答唷 感恩똊
乙醇沉淀时候,加入3M醋酸钠至终浓度0.3M,或者5M氯化钠至终浓度0.15M,
再加入2.5倍体积无水乙醇
其实这时候乙醇的浓度差不多就是70%-75%之间
不加入盐的话,DNA沉淀效率会很低
之後再用75%乙醇洗沉淀是除去与DNA一起沉出的盐,这时候由于DNA已经沉淀出来,
所以没有盐也不容易重新溶进75%乙醇里
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◆ From: 202.127.20.26