看板Biology
标 题Re: [问题] 请问PCR中cycle的数量与Taq用量是否有相关?
发信站KKCITY (Fri Apr 7 18:23:10 2006)
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※ 引述《jpegg ( 委内瑞拉双剑尾)》之铭言：
> ※ 引述《roundball》之铭言：
> > 现在我想要尝试到45个cycle,
> > 是否需要增高Taq用量呢?
> 我以前都是用0.75U 45 cycles
> 而且Taq并不是很贵的那种
> > 我查一下其他相关文献,
> > 通常都是25~35个cycle,
> > 有文章指出若是PCR cycle数量太高,
> > 容易出现不专一性的增幅产物,
> > 有其他方法能在cycle维持在35个循环的前提下,
> > 让条带可以清晰呈现吗?
> 或许可以把ANNEALING温度提高一点点看看
> 其实还可以比较不同厂牌Taq（跟别人借借看） 不同Unit 不同cycle数
> 也许还可以写在论文里面
ㄟ.....原po不会是我学弟吧..........怎麽我愈过的问题你都有
rapd的几个改善要点
1.跟taq没有太大关联 烂taq也做的出来 重点是rapd的r吧 ꘊ酑O高级taq可能会搞出跟便宜taq不同的结果
2.不是很建议cy数目再增加啦....会搞出很多不专一产物而且会越搞越乱
3.如果你确定那条band就是你要的..(难.....不然怎麽叫做RAPD可以把ANNEAL提高3度後
作TUOCH DOWN PCR(GRADENT)找个产物量跟专一性都可接受的温度
4.跑电泳也要注意 理论上冰箱里会跑的比室温漂亮 TBE比TAE漂亮
ETBR低浓度震荡染色 流水退染
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