看板Biology
标 题Re: [问题] 关於抽好的genomic DNA含有多醣杂质~
发信站KKCITY (Thu Apr 6 23:27:29 2006)
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你是抽植物的DNA吗? 怎麽会用CTAB啊? CTAB溶液中, 高盐分(>0.7M)是去除多醣的关键
另外检查一下你的CTAB, 配置5%溶液前, 把它加热到室温, 以避免沉淀. 还有,
你可以在萃取前多加一步清洗手续, 看看以下这个连结跟里面的PDF步骤.
http://pubs.nrc-cnrc.gc.ca/ispmb/r04-043.html
这份步骤里, PVP是随着清洗液倒掉的. Good luck!
> 作者: roundball (飞) 看板: biology
> 请问各位先进,
> 我抽好的genomic DNA纯度都有1.5,
> (OD. 260 / OD. 280的比值)
> 但是残留的多醣跟二次代谢物比DNA的浓度还高,
> (我的研究材料本身有黏稠的汁液)
> 大约是DNA浓度的1.1到1.9倍,
> 有什麽方法可以把这些抽好的DNA所含的多醣,
> 能够再去除一部分呢?
> 由於实验室的药品或设备不是很齐全,
> 希望能够有简易的方法来完成再次纯化,
> --
推 vixen:怎麽抽的讲一下, 比较好给建议 [04/06]
→ roundball:我用5%的CTAB,其他的tris,EDTA,NaCl,2-mercaptoethanol [04/06]
→ roundball:都差不多是常见方法的浓度,也加了20%的SDS打破细胞~ [04/06]
→ roundball:然後水浴加热75度至少40分钟,随後过二次氯仿,留下水层~ [04/06]
→ roundball:加入5M的NaCl,体积为水层的0.5倍,与isopropanol等体积~ [04/06]
→ roundball:overnight沉淀,离心,75%酒精洗一下pellet,乾燥一小时~ [04/06]
→ roundball:加TE buffer回溶,加RNase乾浴37度半小时~ [04/06]
→ roundball:然後phenol+氯仿(1:1)先除蛋白,低温离心取水层~ [04/06]
→ roundball:水层再加一次等体积的氯仿,乳化->离心->取水层~ [04/06]
→ roundball:接着加NaOAc跟isopropanol沉淀,pellet用75%酒精洗一洗~ [04/06]
→ roundball:这样说明可以吗?我忘了说有加PVP-40到萃取buffer除多醣~ [04/06]
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