※ 引述《[email protected] (craft in universe)》之铭言： > ※ 引述《microball (研究院路的紫薇花)》之铭言： > : 厄...你做出的蛋白有tag吗？ > : 如果有的话可以用此纯化，不然可能要用LC之类的纯化？ > : 品质的话...可以用OD去算纯化後的浓度 > : 纯度的话...可以跑SDS gel > 虽然说SDS PAGE可以大致上判别蛋白质的纯度 > 可是浓度上的拿捏似乎就因人而异 > 因此可能需要考虑到蛋白质本身的浓度和loading的总量 > 刚刚进入这个领域 > ㄧ切都还在摸索当中 > 其实我也有上述的困扰 > 还望各位大德能多加提点 跑完SDS之後可以利用image处理软体 很像叫image J还是什麽的 (忘了 ==.==a) 这软体可以分析每一个band的相对强度 如此应该可以做为一个分析纯度的依据 另外 有paper的做法是在protein的前後各做一种tag (例如 N-His, C-Cys) 然後抓两次 这样是最好也是最方便的方式 前之前有一位前辈所提的先用His再用antibady抓是一样的道理 不然也可以试一试跑两次Ni离子亲合性管柱看看吧 也是有人这样做来提高效率 没试过... 毕竟 有tag的蛋白质 在纯化上的回收率是最高的 而且最快 另外 如果你可以提高蛋白质的表现量 那纯度也会上昇的 一般酵素而言 95%以上就算很纯了 可以试试看吧 再跟我们说结东好不好用^^ -- 原来 我已经忘了自己的语言 -- ※ Origin: 元智大学 风之塔 <bbs.yzu.edu.tw> ※ From : h113-210-66-33.seed.net.tw ※ X-Info: Re: [请益] 自己表现的protein用来treat细胞 ※ X-Sign: 122RO2FDWV8oiYN4bsnc (06/04/01 10:07:11 )