作者microball (研究院路的紫薇花)
看板Biology
标题Re: [请益] 自己表现的protein用来treat细胞
时间Fri Mar 31 23:43:42 2006
※ 引述《gidon (打球的幸福呢)》之铭言:
: ※ 引述《microball (研究院路的紫薇花)》之铭言:
: : 厄...你做出的蛋白有tag吗?
: His-tag 有阿
: 可是有用过的人也知道HIS的纯化程度对细胞而言是不够的吧
嗯嗯...如果你要狠一点的话(或是後来发现 LC的仪器有困难)
可以用 tandem tag 做纯化
像是 Flag/His 或是 His/ V5之类的
先用His抓蛋白下来,再用 antibody 抓一次,应该就非常纯了
基本上,无论做了多 high-quality 的纯化
还是无法证明没有杂质~~@@
所以在 control 组方面多做一些,也许会让实验更严谨
: : 如果有的话可以用此纯化,不然可能要用LC之类的纯化?
: 我有想过用FPLC(因为分子较大不适合HPLC)
: 可是不太清楚利用FPLC纯化出来的应该很纯了
: 但是像是外面公司卖的cytokine他们纯度是比这更纯还是已经够了?
: : 品质的话...可以用OD去算纯化後的浓度
: : 纯度的话...可以跑SDS gel
: 感谢大家的解惑
: 自己说一说怎麽觉得那我是不是应该打电话去问卖cytokine&growthfactor
: 的公司问他们他们怎麽做出来的@@"
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