我的实验是做Wnt pathway 简单的说～就是想办法让Wnt pathway on or off 然後去看他的下游gene的expression 目前为止～activate Wnt pathway都没有问题 有问题的是inhibit 我使用的材料是dnTCF TCF是Wnt pathway下游的一个transcription repressor 这个construct是跟别的实验室要的 问题来了 在test的时候就发现我的dnTCF不work 於是就做了transfection跑western看他protein有没有表现 跟wild type比较的结果 western几乎没有表现～（意思就是wtTCF表现很多） 这当中老师怀疑是我transfection的问题 於是我co-transfect了GFP当作internal control 在照相的时候发现GFP的亮度有变 老师又怀疑是我照相的问题 於是我心一横 又做了一次co-transfection with GFP 分别拿去跑flow和做IF 发现其实transfection efficiency都差不多 可是在wtTCF和dnTCF中 GFP的萤光减弱很多（无论是flow或是IF都是这样的结果） 而在IF的结果中 dnTCF几乎没有表现 所以问题有几个 1.到底为什麽我的dnTCF不会表现？？ 我要到的construct是delete掉N-terminal 93个amino acid 而我查paper一般用的dnTCF的construct是delete N-terminal 31或33个amino acid 但是我去查了TCF的 structure 即使delete掉前面93个amino acid应该是不会影响他的function才对 所以我一直不知道为什麽我的dnTCF不表现 2.在wtTCF中看到GFP的萤光亮度减弱是可以理解的 因为TCF是transcription repressor 有可能因此抑制了GFP的表现 重点就在於～这个现象在dnTCF里面也有看到！ 如果dnTCF不会表现，它怎麽去影响GFP的expression？？ （我有做另一个control是transfect plasmid 的backbone但没有任何gene 发现GFP的expression很亮～所以wtTCF和dnTCF相较之下变弱很多） 请版上高手帮忙解答吧 我已经搞这个搞了很久 弄得很挫折 希望大家可以一起讨论～ --

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